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目的:探讨人羊膜间充质干细胞(human amnion-derived mesenchymal stem cells,hAMSCs)移植治疗小鼠类风湿性关节炎的疗效和免疫调节机制,为人羊膜间充质干细胞用于类风湿性关节炎治疗提供实验依据和理论支持。
方法:采用完全福氏佐剂关节腔注射制备小鼠类风湿关节炎模型,体外培养、扩增hAMSCs,尾静脉注射移植,观察治疗前后小鼠一般状况;容积法测定关节容积,计算关节肿胀程度;动态监测外周血血象;X光检查受累关节形态变化,HE染色和免疫组化染色后,图像分析和显微镜下观察关节组织病理学变化;流式细胞仪检测外周血T淋巴细胞亚群变化。
结果:hAMSCs移植治疗类风湿关节炎模型鼠的活动自如,进食正常、皮毛光亮、反应敏捷,体重呈逐渐增长趋势,未见明显不良反应。hAMSCs移植治疗第42d,hAMSCs移植组关节肿胀抑制率较阳性药组(给予甲氨喋呤)高,分别为18.72±4.57%和12.73±2.87%(P<0.05),受累关节肿胀缓解程度明显优于阳性药组。外周血象检查结果显示:hAMSCs移植组治疗前后小鼠各项血细胞指标变化不大,阳性药组在治疗后第11-19 d外周血象中各项指标明显下降。X线检查结果显示:与模型组和阳性药组比较,hAMSCs移植组小鼠左侧后肢足爪肿胀明显较轻,未见明显骨膜反应、骨质疏松或骨质破坏。病理组织检查可见:与模型组、MTX组比较,hAMSCs移植组小鼠关节炎症缓解明显,关节组织未见明显炎性细胞浸润,滑膜组织炎性增生及新生血管形成不明显,无骨软化、骨破坏缺失,关节腔、骨膜、软骨、骨组织结构层次较清楚、完整。免疫组化检测OPG表达情况发现:hAMSCs移植组OPG表达IOD为88.96±16.29,而MTX组则是62.76±10.7,模型组较低为39.22±11.82,而空白组则是28.57±7.4(P<0.01)。流式细胞术检测分析:各实验组均不表达CD3+CD4+CD137+。治疗第20d,hAMSCs移植组CD3+CD4+CD28-为59.11±1.61(%)较空白组和模型组低,后两组分别为65.37±4.52(%)和69.85±2.48(%);CD4+、CD8+、CD4+/CD8+和CD4+CD25+百分率,在3组间比较无明显统计学差异(P>0.05)。治疗第30d,MTX组CD8+阳性细胞百分率和CD4+/CD8+分别为37.22±2.02(%)和1.51±0.14(%)较模型组略有增高,分别为26.27±7.57(%)和2.11±0.54(%);而MTX组CD4+、CD4+CD25+和CD3+CD4+CD28-(%)与空白组、模型组比较,无明显统计学差异(P>0.05);hAMSCs移植组CD8+、CD4+/CD8+为38.91±6.46(%)和1.38±0.36(%)较模型组CD8+细胞有所增高(P<0.05),模型组为26.27±7.57(%)和2.11±0.54(%);hAMSCs移植组CD4+CD25+为1.03±0.28(%)较MTX组明显增高(P<0.01);hAMSCs移植组CD4+、CD3+CD4+CD28-(%)与其他3组比较无明显统计学差异(P>0.05)。
结论:hAMSCs具有定向趋化,调节免疫和促骨膜、软骨修复等作用,具有治疗类风湿关节炎的可行性。