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免疫荧光标记技术的飞速发展使其越来越多地应用于生物医学领域中,例如,机荧光染料标记法,该法已在标记检测分析中发挥着重要的作用,其原理就是通过荧光染料和抗体偶联而成的荧光标记物对目标抗原进行标记,其本质就是抗原抗体结合的反应过程[1-3],同时运用外来光源的激发使被标记物发出肉眼可见的荧光或是红外荧光。虽然该技术已经广泛应用,但在显像能力,荧光强度,荧光稳定性,荧光寿命,多色成像和生物毒性等方面还存在许多有待解决的问题。本文主要研究一种新型的荧光标记物,即由人工合成的半导体纳米颗粒——量子点,并将该荧光标记物与抗体连接,形成新型的免疫荧光探针,实现对肿瘤细胞的特异性免疫荧光标记。此量子点免疫荧光标记技术能克服上述传统的有机荧光染料标记技术的诸多问题。此外,我们还探讨了量子点免疫荧光探针对体外培养的肿瘤细胞的毒性作用,从而对该探针的生物相容性有了进一步的认识。本论文主要研究内容和成果如下:在水相中采用一步水热法合成了CdTeS量子点,该方法操作简单方便,可重复性高,量子点产率高,成本相对较低且毒性较小。我们运用调整反应时间的方法实现了量子点的荧光发射峰从可见光到近红外光范围的有效调控性;通过增加一层CdS的外壳,不仅达到了提高CdTeS/CdS核壳结构的荧光强度的目的,也增强了量子点本身的稳定性及其在物理化学和生物特性等方面的稳定性。将制备的水溶性CdTeS量子点与CK19抗体共价结合得到量子点-CK19抗体免疫荧光探针。通过光谱分析得知共价结合后量子点-CK19抗体探针基本保持了原有的CdTeS量子点的光学性质,激发光谱宽而连续,发射光谱窄而对称,在紫外光(波长365nm)的激发下发出黄色荧光;同时,CK19抗体原本的生物免疫活性也没有受到影响,复合物探针的性质稳定。通过直接免疫荧光法,利用合成的量子点-CK19抗体荧光探针对乳腺癌细胞株MDA-MB-231进行特异性荧光标记。量子点-CK19抗体荧光探针能与抗原特异性的结合,荧光显微镜和激光共聚焦显微镜示在紫外光激发下,该探针能有效对乳腺癌细胞株MDA-MB-231进行特异性荧光标记,荧光主要位于细胞质和细胞膜,荧光清晰明亮,持续时间长。经过长时间反复多次的高强度的激光照射,量子点发出的荧光没有明显的衰减,荧光寿命能持续14天以上。探针与乳腺癌细胞株MDA-MB-231作用后,分别采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,MTT法检测细胞增殖变化。结果证明在有效标记浓度至八倍于有效标记浓度的范围内,该探针不会诱导细胞凋亡;细胞增殖会随着探针浓度的增加和作用时间的延长而受到抑制,但在小于八倍有效标记浓度的范围内,该探针对体外培养的乳腺癌细胞不会产生明显的增殖抑制作用,该浓度范围是相对安全的。