三角梅转录组SSR分子标记开发与离体再生体系构建

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为了明确三角梅转录组SSR总体特征、开发出适用于分子育种的SSR引物,筛选出和鉴定苞片差异表达基因,本实验采用Illumina测序平台对B.spectabilis cv‘Speciosa’不同发育时期的叶片、苞片,及初开期的花的转录组进行高通量测序。根据转录组测序结果,采用MISA分析’Speciosa’转录组SSR位点信息,利用Primer 3设计引物,并选择50对引物对6个不同种和杂交种三角梅进行可转移性与多样性分析。结果表明:在‘Speciosa’转录组中,共检测出79 210个SSR位点,分布于60 318条Unigene中,出现频率为44.91%。优势重复基序为单核苷酸、双核苷酸,分别占总SSR位点的76.37%和13.26%。A/T和AG/CT分别是单核苷酸、双核苷酸的优势重复基元,占总SSR重复类型的71.66%和6.77%。挑选的50对引物中,有42对引物可以扩增到清晰稳定的目标条带,有效扩增率为84.00%,不同品种间的平均可转移率为85.86%;其中33对引物具有多态性,平均He和PIC分别为0.5548和0.4603。为实现三角梅种质创新的目的,诱导足够的愈伤组织,在组培水平上诱导多倍体育种做铺垫,实验取B.glabra cv‘Singerpore Pink’、B.specto-peruviana cv‘Mrs Butt’的幼嫩茎段、叶片,B.glabra cv‘Formosa’、B.spectabis cv‘Speciosa’播种两周后长出的下胚轴和子叶,以MS为基本培养基,设计不同激素水平的培养基加以比较,筛选出愈伤组织长势良好的生长素和细胞分裂素的最优配比,用最适的培养基继续增殖以获得足够的愈伤组织。结果表明,三角梅茎段与下胚轴更适合作为外植体来诱导愈伤组织。其中,适宜‘Singerpore Pink’茎段愈伤组织的培养基为MS+NAA0.2mg/L+6-BA1.0mg/L,适宜‘Mrs Butt’的茎段愈伤组织的培养基为MS+NAA0.2mg/L+6-BA0.5-1.0mg/L;适宜’Formosa’下胚轴愈伤组织培养基为 MS+IBA 0.1mg/L+6-BA 2.Omg/L。尚未发现适宜’Speciosa’下胚轴愈伤组织的培养基。
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