将疑似传染性胃肠炎病猪的粪便病料进行处理后,接种于猪睾丸传代细胞(ST)中观察,得到稳定的细胞病变。通过核酸类型实验、脂溶剂敏感性实验,显示该病毒为有囊膜的RNA病毒;使用电子显微镜观察病毒形态,可以看到直径大小约90nm的病毒粒了;通过中和实验,将病毒细胞接种液和猪传染性胃肠炎病毒兔高免血清发生中和反应,得到了较高的中和滴度。结果表明成功地分离并鉴定了一株传染性胃肠炎病毒,并命名为TGEV SC-A。 根据GenBank报道的猪传染性胃肠炎序列,设计包含TGEV的S基因1760bp的部分片段的一对引物。通过RT-PCR技术扩增,得到了一条约1.8kb序列,通过低熔点琼脂糖纯化回收该片段后,将此片段连接在pDM18-T载体上,转化DH5 a大肠杆菌,使用双酶切和PCR法对重组质粒进行鉴定后,将重组质粒送大连宝生物公司测序。 通过DNAstar软件的同源性搜索和多重序列比较分析,结果显示四川株TGEV与国外报道的部分TGEV病毒分离株具有较高的同源性,并且其保守序列基本一致;建立了猪传染性胃肠炎病毒的基因进化树,了解到TGEV SC-A株和来自欧洲,亚洲和中国的不同分离株之间的亲缘关系;通过疏水性分析,TGEV的S蛋白具有较强的亲水性,也存在明显的疏水性区段;TGEV SC-A株的S蛋白抗原位点的分析表明,其中有较明显的抗原位点存在。