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目的:本研究采用血小板源性生长因子(Platelet derived growth factor,PDGF)-BB体外诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞(Pulmonary arterial smooth muscle cells,PASMCs)异常增殖,观察白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)、GATA6转录因子(GATA6 transcription factor)的表达变化;通过阻断IL-6/JAK2/STAT3信号通路、抑制甲基化转移酶活性、干扰或过表达IL-6,探讨IL-6、GATA6在PASMCs异常增殖中的作用及分子机制。方法:1.采用Ⅰ型胶原酶消化法原代培养大鼠PASMCs;用15、30、60μg/L的PDGF-BB诱导PASMCs,CCK-8检测PASMCs的增殖变化;碘化丙啶染色检测PDGF-BB对PASMCs细胞周期的影响;分别用Western Blot(WB)法和q RT-PCR法检测PASMCs增殖中IL-6、GATA6蛋白和m RNA的表达变化。2.分别用JAK2/STAT3通路抑制剂AG490和甲基化转移酶抑制剂5-Aza干预PASMCs,CCK-8检测PASMCs的增殖变化;q RT-PCR法检测IL-6、GATA6、JAK2、STAT3m RNA表达;WB法检测GATA6、JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3表达;甲基化PCR(MSP)检测GATA6甲基化程度。3.IL-6过表达部分将PASMCs分为4组:空载体组(vector)、IL-6过表达组(IL-6)、30μg/L PDGF-BB+空载体组(PDGF-BB+vector)、30μg/L PDGF-BB+IL-6过表达组(PDGF-BB+IL-6);IL-6干扰部分将PASMCs分为4组:NC组、IL-6si RNA组(si-IL-6)、30μg/L PDGF-BB+NC组(PDGF-BB+NC)、30μg/L PDGF-BB+IL-6si RNA组(PDGF-BB+si-IL-6),用q RT-PCR法检测IL-6、GATA6、JAK2、STAT3 m RNA水平;WB法检测GATA6、JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3表达;MSP检测GATA6甲基化程度。结果:1.15、30、60μg/L的PDGF-BB诱导PASMCs 24 h、48 h增殖显著,其中以30μg/L诱导48 h效果最佳(P<0.05);2.与对照组相比,30μg/L PDGF-BB刺激PASMCs 48 h后细胞G1期百分比显著下降,而S期和G2期百分比明显增加(P<0.05);与对照组相比,PDGF-BB组IL-6表达增高,GATA6表达降低(P<0.05),具有时间依赖性;30μg/L PDGF-BB诱导的PASMCs增殖与IL-6表达呈正相关(r=0.538,P<0.05),与GATA6表达呈负相关(r=-0.647,P<0.05);IL-6与GATA6的表达呈负相关(r=-0.705,P<0.05);3.与对照组相比,0μM AG490组IL-6、JAK2、STAT3 m RNA表达增高,p-JAK2/JAK2和p-STAT3/STAT3水平增高,GATA6 m RNA及蛋白表达降低,GATA6甲基化程度增加;与0μM AG490组相比,25μM、50μM和100μM AG490组细胞增殖减少,IL-6、JAK2、STAT3 m RNA表达降低,p-JAK2/JAK2水平降低,GATA6 m RNA及蛋白表达增高(P均<0.05),GATA6甲基化程度逐渐降低,50μM和100μM组p-STAT3/STAT3水平降低(P<0.05);4.与0μM 5-Aza组相比,1μM、3μM、5μM 5-Aza组细胞增殖减少,IL-6m RNA表达降低,GATA6蛋白、p-STAT3/STAT3表达增高,p-JAK2/JAK2水平降低,GATA6甲基化程度逐渐降低(P均<0.05),JAK2、STAT3 m RNA水平无显著差异;3μM和5μM 5-Aza组中GATA6 m RNA表达增高(P<0.05);5.与vector组比较,IL-6组、PDGF-BB+vector组、PDGF-BB+IL-6组细胞增殖明显、GATA6甲基化程度增加,IL-6组和PDGF-BB+vector组JAK2、STAT3m RNA表达增加、p-JAK2/JAK2和p-STAT3/STAT3表达增加、GATA6 m RNA及蛋白表达降低(P均<0.05);与PDGF-BB+vector组比较,PDGF-BB+IL-6组细胞增殖明显,JAK2、STAT3 m RNA表达增高,p-JAK2/JAK2和p-STAT3/STAT3表达增高,GATA6 m RNA及蛋白表达降低,GATA6甲基化程度增加(P均<0.05);6.与NC组比较,si-IL-6组细胞明显减少、JAK2、STAT3 m RNA表达降低、p-JAK2/JAK2和p-STAT3/STAT3表达降低、GATA6 m RNA及蛋白表达增加、GATA6甲基化程度降低,PDGF-BB+NC组GATA6甲基化程度增加(P均<0.05);与PDGF-BB+NC组比较,PDGF-BB+si-IL-6组细胞明显减少、JAK2、STAT3m RNA表达降低、p-JAK2/JAK2和p-STAT3/STAT3表达降低、GATA6 m RNA及蛋白表达增加,PDGF-BB+si-IL-6组GATA6甲基化程度降低(P均<0.05)。结论:1.PDGF-BB能成功诱导体外培养的大鼠PASMCs增殖;2.IL-6、GATA6参与PDGF-BB诱导PASMCs增殖的发生和发展。3.PDGF-BB促进PASMCs增殖的可能机制是PDGF-BB诱导PASMCs高表达IL-6,激活JAK2/STAT3信号通路,调节GATA6启动子高甲基化,抑制GATA6的表达,从而导致PASMCs的异常增殖。