【摘 要】
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鸡球虫病(Coccidiosis)是由艾美耳属(Eimeria)的各种球虫寄生在鸡的肠道引起的寄生性原虫病,所有日龄和品种的鸡都易感,严重影响了养殖业的发展。卡介苗(BCG)集佐剂与抗原于
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鸡球虫病(Coccidiosis)是由艾美耳属(Eimeria)的各种球虫寄生在鸡的肠道引起的寄生性原虫病,所有日龄和品种的鸡都易感,严重影响了养殖业的发展。卡介苗(BCG)集佐剂与抗原于一身,是表达外源基因的理想活菌疫苗载体。为探讨重组卡介苗(rBCG)对鸡球虫感染的免疫保护作用,本研究首先构建了E.tenella rhomboid基因穿梭表达载体pMV261-Rho和整合表达载体pMV361-Rho,并在BCG内进行了rhomboid基因的诱导表达和免疫原性分析;然后将两种rBCG疫苗通过不同途径免疫雏鸡,观察其对动物免疫保护效果;在此基础上构建EGFP标记的rBCG,对Rhomboid蛋白在鸡体内各组织器官中的分布及稳定性和消长规律进行了研究;此外还将rhomboid基因与鸡IL-2基因(ChIL-2)联合构建rBCG,观察抗球虫效果。结果表明在鸡肝、脾、肺、肾、盲肠各组织器官均检测到rhomboid基因表达,雏鸡免疫14天后基因表达量达到最高,随后开始下降,至28天后消失;动物免疫保护性实验表明rBCG疫苗对E.tenella卵囊的攻击具有一定的免疫保护作用,诱导产生细胞免疫和体液免疫反应,且以滴鼻方式免疫效果最佳,抗球虫指数为174.6;将rhomboid基因与ChIL-2基因联合在卡介苗中表达,结果显示IL-2具有明显增强Rhomboid蛋白的免疫保护作用,其中pMV261-Rho-IL-2滴鼻免疫组保护效果最为明显,抗球虫指数ACI达到180以上,已达到临床使用的要求。本研究为球虫病的预防奠定了基础。
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