【摘 要】
：
Kirsten rat sarcoma viral oncogene homolog（Kras）是一个编码小GTP酶转导蛋白KRAS的原癌基因,目前的研究表明,KRAS能够促进细胞因子分泌、细胞存活和趋化性。然而,KRAS对前体脂肪细胞分化和脂质蓄积的具体作用目前尚未有相关报道。因此,本研究使用si RNA敲降Kras的表达水平,探究其对3T3-L1和C2C12细胞增殖、自噬、成脂分化和脂质蓄积的
论文部分内容阅读
Kirsten rat sarcoma viral oncogene homolog（Kras）是一个编码小GTP酶转导蛋白KRAS的原癌基因,目前的研究表明,KRAS能够促进细胞因子分泌、细胞存活和趋化性。然而,KRAS对前体脂肪细胞分化和脂质蓄积的具体作用目前尚未有相关报道。因此,本研究使用si RNA敲降Kras的表达水平,探究其对3T3-L1和C2C12细胞增殖、自噬、成脂分化和脂质蓄积的影响及作用机制。首先,为探究KRAS对3T3-L1和C2C12细胞增殖能力的影响,本研究利用si-KRAS抑制KRAS表达后,通过Ed U和CCK-8方法检测增殖变化;通过q RT-PCR检测细胞增殖相关基因Mtor、Pcna和Myc的m RNA表达水平的变化。结果表明,敲降KRAS后,3T3-L1和C2C12细胞增殖比例（分别为对照组的0.89±0.07、0.90±0.05倍）以及CCK-8细胞增殖活力均显著下降（分别为对照组的0.82±0.02倍和0.80±0.02倍）;增殖相关基因Mtor、Pcna和Myc的m RNA表达水平也显著下降。随后,我们探讨了KRAS对细胞自噬的影响。在抑制KRAS表达后,通过免疫荧光染色检测细胞质内LC3B的表达变化;通过Western blot检测细胞自噬关键蛋白LC3B-II/LC3B-I的表达变化;通过q RT-PCR检测自噬相关基因Beclin 1和Atg7的m RNA表达变化。相关结果表明,敲降KRAS后,3T3-L1和C2C12细胞内LC3B的荧光强度（分别为对照组的1.78±0.11倍和1.38±0.04倍）及LC3B-II/LC3B-I的水平显著增加（分别为对照组的2.25±0.06倍和1.84±0.14倍）,并且,Beclin 1和Atg7的m RNA水平也显著上升。最后,我们探讨了KRAS对3T3-L1和C2C12细胞成脂分化的影响及作用机制。在敲降KRAS后,本研究通过油红O（ORO）染色、甘油三酯水平检测以及成脂相关基因Dgat1、Scd1、C/ebpβ和Hmgr的m RNA表达水平检测明确了KRAS对成脂分化和脂质蓄积的影响;通过Western Blot方法检测了MAPKs（ERKs、JNKs和p38）、PI3K磷酸化水平的变化;通过分别添加MAPK和PI3K通路的激活剂ANI和740 Y-P,探究KRAS对3T3-L1和C2C12细胞成脂的潜在作用机制。结果表明,抑制KRAS表达后,细胞内甘油三酯水平（分别为对照组的1.24±0.02倍、1.24±0.01倍）、ORO OD520值以及Dgat1、Scd1和C/ebpβm RNA表达水平显著增加,ERK1/2、JNK1/2/3、p38以及PI3K的磷酸化水平显著下降。并且,MAPK通路激活剂ANI可以显著下调由抑制KRAS引起的甘油三酯水平的上升,而740 Y-P对敲降KRAS引起的甘油三酯水平变化则没有下调作用,反而进一步加强了脂质蓄积。综上,本研究表明KRAS可以调控3T3-L1和C2C12细胞增殖、自噬和成脂分化。研究结果有助于从分子水平解析脂肪的形成和积累的过程及机制,从而为调控肉类营养和成分、提升肉质提供了理论依据。
其他文献
牛肠道病毒（bovine enterovirus,BEV）和柯萨奇病毒、脊髓灰质炎病毒等同属于小RNA病毒科（Picornaviridae）肠道病毒属的成员。BEV感染能够在临床上引起牛呈现以消化系统和呼吸系统症状为主要特征的传染病,且可与其它病毒混合感染,给我国养牛业造成了较为严重的经济损失。前期研究发现,HY12毒株对小鼠具有很高的侵袭力,感染后短时间就能够在多个组织中定殖,甚至能够侵袭中枢神
近年来,如何使用机器学习进行股票选择成为了量化交易领域的一个热门研究方向,并且已经为许多投资公司带来巨大的经济效益。然而,目前的机器学习选股算法仍然存在着一定的局限性:大部分算法都使用分类或回归的方式进行求解,但选股问题本质上更接近于排序问题,对分类或回归指标进行优化并不能得到最优解;与此同时,机器学习模型本身的高复杂性和低解释性,使得其决策过程难以被人脑直观理解,投资人无法赋予机器学习模型足够的
随着互联网的迅猛发展,人们普遍面临的信息过载问题日益严重。推荐系统的存在降低了用户获取有效信息的成本,提高了广大用户的上网体验,缓解了信息过载问题。基于会话的推荐系统是现代推荐系统的一个重要分支,其目的是根据匿名用户在一个会话内的行为序列（如商品点击序列）,预测用户下一个点击的商品。随着对会话推荐问题研究的不断深入,许多不同的解决方法被提了出来。现有方法都是从相邻的多条会话序列中挖掘相似的用户行为
乳腺炎是一种奶牛中常见的传染性疾病,其影响范围广且容易复发。病原微生物感染乳腺,释放脂多糖（LPS）等大分子物质刺激免疫反应,引发乳腺炎。乳腺炎的发生不仅损害奶牛的健康,导致奶牛淘汰增加、生产寿命减少、治疗费用增加,还会引起产奶量减少,乳品质下降,造成经济损失。因此,奶牛乳腺炎的预防和治疗至关重要。鱼腥草（H.cordata）是一种传统的中草药,被广泛应用于临床治疗。已有研究表明,鱼腥草具有抗菌、
脱氧雪腐镰刀菌烯醇生物作用众多,它的英文全称是Deoxynivalenol,一般简称为DON,这种物质在生化作用中起着负面作用,即使是残留部分,如果畜禽食用后,会引起强烈的呕吐反应,由于这种现象,通常人们又将它称作呕吐毒素。由于人类是食物链顶端的食肉动物,在食物链任一环节中,若有动物食用该到呕吐毒素时,最终都会通过食物链进入人体。因此,这种物质对人类来说,同样具有一定的危害作用。呕吐毒素是镰刀菌属
人脸识别技术已经成为日常生活中应用最广泛的身份认证方式,但是人脸信息极易泄露,攻击者仅通过成本较低的打印攻击或视频重放攻击就有可能攻破人脸识别系统,相关事件也时有发生,给人脸识别系统的安全应用带来了极大的挑战。目前业界先进的人脸反欺诈算法借助深度学习技术实现了非常好的欺诈人脸检测效果,但是他们都只考虑如何提高欺诈人脸检测效果,为此他们提升了网络的大小,引入了RGB模态之外的信息和时序信息。这些方法
热休克蛋白A6（heat shock protein A6,HSPA6）是HSP70家族中的一员,属于严格诱导表达型基因。HSPA6基础表达水平较低或不表达,当在特定应激源的刺激条件下,其表达水平会迅速、显著升高。相对于HSP70家族的其它成员,关于HSPA6基因的研究较少,目前针对HSPA6的转录调控序列元件及调控机制方面的研究仍有待完善。近期关于该基因启动子序列的分析结果表明,在转录起始位点-
三维网格模型的轮廓渲染（描边）有着广泛的应用。基于CPU的描边算法,虽然能实现较高级的风格化处理,实现,但只能离线渲染,无法达到实时。而基于GPU的实时加速算法又往往受限于GPU的并行特性,不得不牺牲部分高级风格化效果。其原因在于这些实时算法都无法将轮廓元素（网格边或是屏幕像素）链接（矢量化）成线条。本文提出了一个基于GPU的实时网格轮廓渲染方法,包含如下几个环节:首先,从三维网格模型中提取轮廓线
随着半导体工艺技术不断提高,芯片设计规模也在不断增大,特别是基于IP复用的设计方法学被提出,越来越多的处理器、存储器等都集成到系统级芯片中。为了满足设计规模越来越大的验证需求,提高验证效率就显得非常重要。基于System Verilog的UVM（Universal Verification Methodology）的提出,大大提高了验证工作的效率,因此成为业界验证的主流。然而从EDA验证框架角度考
甲型流感病毒（Influenza A Virus,IAV）是单股的负链RNA包膜病毒,属于正黏病毒科（Orthomyxoviridae）,因为其传播速度和变异速率很快,且致病率和致死率都较高,一直严重威胁着人类和动物的健康及生命安全。环状RNA（Circular RNA,circ RNA）是一种闭合的环状非编码RNA（Non-coding RNA,nc RNA）,作为一种重要的表观遗传调控因子,c