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自身免疫性溶血性贫血（autoimmune hemolytic anemia,AIHA）/Evans综合征是一种由免疫系统对抗自身红细胞和/或血小板,导致红细胞和/或血小板寿命明显缩短、破坏增多的免疫性血细胞减少症,B淋巴细胞在AIHA/Evans综合征中具有重要作用,目前公认B细胞是异质性群体,除主要分泌抗体为主的B细胞群,还具有分泌细胞因子、发挥免疫调节作用的B细胞,这类B细胞被称为调节性B细胞（Bregs）[1]。B淋巴细胞据其细胞表面CD5的表达情况,可分为CD5+（B1）和CD5-（B2）B淋巴细胞两个亚群,CD5+B淋巴细胞亚群具有重要功能[2]。CD5+B细胞在许多研究中被认为具有调节性,因此被纳入Breg细胞家族。既往研究发现CD5+B淋巴细胞在AIHA/Evans综合征患者中数量增高,且与疾病的严重程度相关[3];主要分泌IL-10[4],推测其在AIHA/Evans综合征患者体内发挥免疫调节作用。CD5+B细胞是否通过CD5发挥免疫调控作用?是否还存在如Foxp3、PD-L1等调控细胞群?本论文拟检测AIHA/Evans综合征患者外周血B、T淋巴细胞表面CD5分子表达和血清CD5分子水平及临床意义,同时检测CD5+B淋巴细胞表面Foxp3、PD-L1、PD-L2及Fas L的表达,并分析以上检测指标与临床指标的相关性,研究AIHA/Evans综合征患者CD5+B淋巴细胞发挥调控作用可能的环节。第一部分AIHA/Evans患者外周血CD5分子水平及临床意义目的:了解AIHA/Evans综合征患者外周血CD5分子水平及临床意义方法:应用流式细胞术（FCM）检测18例溶血发作AIHA/Evans综合征患者,12例缓解AIHA/Evans综合征患者外周B、T淋巴细胞CD5表达的平均荧光强度（MFI）;采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法测血清CD5浓度,以13名健康对照者为阴性对照,6例CLL患者为阳性对照,并分析上述指标与临床指标的相关性。结果:1、AIHA/Evans综合征患者溶血发作组CD19+B淋巴细胞CD5MFI[（41.67±14.44）%]高于缓解组[（20.50±9.75）%,P=0.0005]及健康对照组[（18.43±15.80）%,P=0.018]。AIHA/Evans综合征患者CD19+B淋巴细胞CD5 MFI与RBC（R=-0.624,P=0.002）、HB（R=-0.668,P=0.0005）呈负相关,与RET%（R=0.97,P<0.0001）呈正相关。2、AIHA/Evans综合征患者溶血发作组CD4+T淋巴细胞CD5平均荧光强度[（16029±4892）%]低于缓解组[（22895±4892）%,P<0.01]及健康对照组[（22967±5372）%,P<0.01],高于CLL组[（8834±6043）%,P<0.05],差异均具有统计学意义。3、AIHA/Evans综合征患者溶血发作组CD8+T淋巴细胞CD5 MFI[（10876±3765）%]低于缓解组[（14779±4165）%,P<0.05]及健康对照组[（5096±4271）%,P<0.05],高于CLL组[（5096±4271）%,P<0.05]。4、AIHA/Evans综合征患者血清CD5浓度[（4.08±5.80）ng/ml]高于健康对照组[（1.44±1.77）ng/ml,（P<0.05）]。AIHA/Evans综合征患者溶血发作组血清CD5浓度[（5.87±7.74）ng/ml]高于缓解组[（2.30±1.72）ng/ml,P=0.097]及健康对照组[（1.44±1.77）ng/ml,（P<0.01）],溶血发作组与健康对照组差异有统计学意义。AIHA/Evans综合征患者血清CD5浓度与Ret绝对计数（R=0.415,P=0.023）,补体C4（R=0.430,P=0.036）,CRP（R=0.896;P<0.0001）呈正相关。结论:CD5在AIHA/Evans综合征患者在不同淋巴细胞上的表达强度不同,B淋巴细胞上增强,T淋巴细胞表面下降;血清游离CD5浓度增高。第二部分AIHA/Evans患者CD5+B淋巴细胞调节功能研究目的:了解AIHA/Evans综合征患者外周血CD5+B淋巴细胞免疫调控作用方法:应用流式细胞术（FCM）检测19例溶血AIHA/Evans综合征患者,12例缓解AIHA/Evans综合征患者以及健康对照者外周血CD19+CD5+和CD19+CD5-B淋巴细胞Foxp3、PD-L1、PD-L2及Fas L的表达,RT-PCR方法测CD19+B淋巴细胞Foxp3、PD-L1、PD-L2及Fas L m RNA水平,并分析其与临床指标的相关性。结果:1、AIHA/Evans综合征患者溶血发作组CD19+CD5+Foxp3+/CD19+CD5+B淋巴细胞比例[（62.57±21.77）%]高于缓解组[（28.97±24.31）%,P<0.01]及健康对照组[（23.04±16.40）%,P<0.0001]。溶血发作组CD19+CD5+Foxp3+/CD19+B淋巴细胞比例[（11.42+15.71）%]高于缓解组[（1.81±2.01）%,P<0.05]及健康对照组[（1.66±1.37）%,P<0.05]。AIHA/Evans综合征患者CD19+CD5+Foxp3+/CD19+CD5+B淋巴细胞比例与HB（R=0.57,P=0.007）呈负相关,与TBIL（R=0.467,P=0.033）、IBIL（R=0.438,P=0.047）呈正相关。2、AIHA/Evans综合征患者溶血发作组CD19+CD5-Foxp3+/CD19+CD5-B淋巴细胞比例[（36.04±27.65）%]高于缓解组[（14.37±13.84）%,P<0.05]及健康对照组[（13.71±16.76）%,P<0.05]。溶血发作组CD19+CD5-Foxp3+/CD19+B淋巴细胞比例[（30.37±23.07）%]高于缓解组[（12.63±8.69）%]及健康对照组[（10.74±12.67）%,P<0.01]。AIHA/Evans综合征患者CD19+CD5-Foxp3+/CD19+CD5-B淋巴细胞比例与TBIL（R=0.544,P=0.001）、IBIL（R=0.499,P=0.021）呈正相关;CD19+CD5-Foxp3+/CD19+B淋巴细胞比例与HB（R=-0.487,P=0.025）呈负相关,与TBIL（R=0.632,P=0.002）、IBIL（R=0.584,P=0.005）呈正相关。3、AIHA/Evans综合征患者溶血发作组CD19+CD5+Foxp3+/CD19+CD5+B淋巴细胞比例[（62.57±21.77）%]高于CD19+CD5-Foxp3+/CD19+CD5-B淋巴细胞比例[（36.04±27.65）%,P<0.05]。4、AIHA/Evans综合征患者CD19+Foxp3+/CD19+淋巴细胞比例[（29.77±27.61）%]高于健康对照组[（12.39±13.38）%,P<0.05]。AIHA/Evans综合征患者溶血发作组CD19+Foxp3+/CD19+B淋巴细胞比例[（41.27±31.40）%]高于缓解组[（14.44±9.31）%,P=0.09]及健康对照组[（12.39±13.38）%,P<0.05],溶血发作组与健康对照组比较差异有统计学意义。AIHA/Evans综合征患者CD19+Foxp3+/CD19+B淋巴细胞比例与TBIL（R=0.587,P=0.005）、DBIL（R=0.684,P=0.005）、IBIL（R=0.545,P=0.011）呈正相关,与HB（R=-0.539,P=0.011）呈负相关。5、AIHA/Evans综合征患者溶血发作组CD19+B淋巴细胞内Foxp3 m RNA表达（86.72±91.87）高于缓解（26.10±26.16）及健康对照组（8.53±14.76）,差异有统计学意义（P<0.05）。6、AIHA/Evans综合征患者发作组CD19+CD5+PD-L1+/CD19+CD5+比例[（5.93±4.67）%]低于缓解组[（16.45±12.91）%,P<0.01]和健康对照组[（9.67±9.50）%]。AIHA/Evans综合征患者CD19+CD5+PD-L1+/CD19+CD5+比例与RBC（R=0.461,P=0.009）、HB（R=0.359,P=0.047）、C3（R=0.485,P=0.008）及C4（R=0.395,P=0.034）呈正相关;与Ret绝对计数（R=0.371,P=0.040）呈负相关。AIHA/Evans综合征患者CD19+CD5-PD-L1+/CD19+比例与Ig E（R=0.384,P=0.040）呈正相关。7、AIHA/Evans综合征患者外周血溶血发作组CD19+B淋巴细胞PD-L1 m RNA的表达与缓解组和健康对照组间差异无统计学意义。8、AIHA/Evans综合征患者溶血发作组、缓解组和健康对照组CD5+B淋巴细胞PD-L2比例均无统计学差异。AIHA/Evans综合征患者CD19+CD5-PD-L2+/CD19+比例与Ig E（R=0.496,P=0.040）呈正相关。各组CD19+B淋巴细胞PD-L2 m RNA的表达无统计学意义。9、AIHA/Evans综合征患者溶血发作组CD19+CD5+Fas L+/CD19+CD5+B淋巴细胞比例[（6.64±6.70）%]高于CD19+CD5-Fas L+/CD19+CD5-B淋巴细胞比例[（1.68±1.54）%,P<0.05]。CD19+CD5+Fas L+/CD19+CD5+B淋巴细胞比例与C4（R=0.534,P=0.033）呈正相关,Ig G（R=0.551,P=0.027）呈负相关。AIHA/Evans综合征患者和健康对照组外周血CD19+B淋巴细胞内Fas L m RNA的表达无统计学意义。结论:AIHA/Evans患者外周血CD5+B淋巴细胞可能通过Foxp3发挥免疫调控作用,不通过PD-L1、PD-L2和Fas L发挥调控作用。