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(Ⅰ)CPI是一类半胱氨酸蛋白酶的抑制因子,广泛分布于动物,植物,微生物等各种生物中,在各种生理过程和病理过程中起着重要作用。CPI超家族主要包含三类:stefin,cystatin,kininogen。CPI的主要作用是通过调节其靶蛋白酶活性来实现。其靶酶包括以papain为代表C1半胱氨酸蛋白酶和以legumain为代表的C13天冬氨酸蛋白酶。A1-CPI与Hp-CPI是寄生虫半胱氨酸蛋白酶抑制因子,分别来自人体蛔虫和小鼠体内的线虫。他们不仅对寄生虫自身生长发育有重要的调节功能,而且还能够通过对其宿主的组织蛋白酶的调控,实行对宿主的免疫调节,从而逃避宿主免疫作用。本研究中通过对Al-CPI的两种聚合状态的蛋白进行结晶筛选,并解析出A1-CPI的三个晶体结构。在这三个结构中,其中两个为二聚体结构,一个为单体结构。通过三个结构的比较分析,发现二聚化时,不仅是L1会形成βL结构,且L2也发生重大变化,使其活性残基(PW)偏离原来活性中心位置,最终导致二聚体活性丧失。本研究从结构基础上进一步阐述其功能的作用机制。研究还发现,寄生虫类的CPI相对非寄生类的CPI来说,具有两大特点:更加紧密的核心结构域和更加开放的活性部位区域。这是结构与功能长期进化的结果。(Ⅱ)高尔基体2型磷酸化蛋白(GOLPHⅡ)是一种高尔基体的驻留蛋白,又称为高尔基体1型膜蛋白(GOLMⅠ)。GOLPH Ⅱ蛋白最早是由Kladney等人在肝炎巨噬细胞中发现并分离鉴定。人的GOLPHⅡ基因位于9号常染色体上,其编码的蛋白具有401个氨基酸,其分子量大小为45333.23Da,预测等电点(PI)为4.71。由于此蛋白为酸性蛋白以及糖基化等修饰的作用,在SDS-PAGE检测中,其表观分子量73KD左右,故又称为GP73。GP73蛋白广泛表达于各种人体组织的上皮细胞中。目前研究结果表明:在正常人的肝细胞中,GP73不表达或表达量很低。而在肝脏疾病患者中,肝细胞的GP73表达含量明显上升。因此,GP73可以作为一种生物标签来诊断肝脏相关的疾病。本实验试图通过对爪蟾的GP73(xGP73)和人源的GP73(hGP73)的蛋白表达,纯化,结晶,以及结构的解析等来研究的其结构与功能的关系。并希望通过结构学研究,对GP73功能的研究能提供帮助,以及对GP73作为肝癌诊断的生物标签提供一个理论基础。