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目的: 将表达刚地弓形虫ROP18的真核表达载体在293T细胞中表达，研究弓形虫ROP18对宿主细胞凋亡的影响，并探讨其调控细胞凋亡的机制。 方法: 复苏实验室已构建的含有p3XFLAG-Myc-CMVTM-24-ROP18质粒的菌株，以无内毒素质粒大量提取试剂盒提取质粒。使用阳离子聚合物RonfectTM将质粒转染至293T细胞中，于24h、36h、48h、60h收集转染后细胞，用抗c-myc标签抗体Wensternblotting技术检测不同时间点ROP18的表达量。 24孔或6孔培养板中接种293T细胞，分别设对照组和转染组，培养24 h后向转染组细胞中转染ROP18。使用0.5μg/ml放线菌素D(Act D)处理细胞24h从而诱导凋亡。于转染后24h、36h、48h、60h收集细胞，分别检测以下指标。 将细胞用AnnexinⅤ-FITC/PI染色，以流式细胞术检测细胞凋亡率。 将细胞线粒体与胞质分离，用Western blotting检测细胞色素C在线粒体与胞质中的分布。细胞经JC-1染色后，流式细胞术检测细胞线粒体跨膜电位。 提取标本中RNA并反转录为cDNA，实时荧光定量PCR检测细胞Bcl-2基因及Bax基因的拷贝数并计算两者比值。 结果: 转染后24h、36h、48h、60h的细胞，Western blotting均能检测出55 kDa处特异性条带，与ROP18分子量大小相同，且ROP18表达量由24h至60h呈递增趋势。 转染后24h、36h、48h，ROP18转染组细胞凋亡率均低于未转染组，其中48h两组差别有统计学意义(P＜0.05)，60h两组凋亡率无差异。 转染24h、36h后细胞线粒体细胞色素C含量ROP18转染组高于未转染组(P＜0.05)，而细胞胞浆中细胞色素C含量低于未转染组(P＜0.05)。转染24h、36h后线粒体跨膜电位ROP18转染组高于未转染组(P＜0.05)。 转染后36h、48h、60h，ROP18转染组Bcl-2与Bax比值明显高于未转染组(P＜0.05)。 结论: 在宿主细胞中成功表达弓形虫ROP18蛋白。弓形虫ROP18能抑制宿主细胞凋亡。其机制是弓形虫通过分泌ROP18，上调宿主细胞Bcl-2/Bax比值，阻止细胞色素C释放和线粒体跨膜电位耗散，保护宿主细胞线粒体膜完整性，从而调控宿主细胞凋亡的线粒体途径。