川芎中具有神经保护作用的Z-藁苯内酯的提取分离与纯化

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随着人们生活的改善、节奏的加快、压力的不断增大以及不良的生活习惯等,脑卒中患者也在逐年增加,是目前导致人类死亡与残疾的三大主要疾病之一。目前临床上还缺乏有效的治疗与康复卒中后遗症的靶点与药物,而中医临床实践表明中医药对治疗脑卒中有着独特的优势。川芎是我国使用历史悠久的传统活血化瘀类药材,是中医药治疗脑中风、偏瘫,偏麻、语言不利等疾病的常用中药。川芎中富含藁苯内酯,藁苯内酯属于苯酞类化合物,分为顺式藁苯内酯(Z型)和反式藁苯内酯(E型),川芎中主要以Z-藁苯内酯为主。Z-藁苯内酯具有活血化瘀、神经保护作用、抑制VSMCs增殖作用、保持血管壁的舒张、抗氧化、抗皱、缓解肌肉筋挛等作用,但藁本内酯纯品的热不稳定性限制了其作为天然药物新药的深入研究与开发。因此,本论文通过采用常温下柱层析提取、分离和纯化藁本内酯活性单体,为其稳定性研究和神经损伤保护功能的药理作用机制研究奠定物质基础。本论文以川芎为中药原材料,采用柱层析提取,以Z-藁苯内酯为提取指标,系统统研究了提取溶剂、浸泡时间、提取用量等等因素对目标成分提取率的影响,得到柱层析提取的最佳条件为:取川芎(20目-80目),按1.6ml/g材料干重的比例加入石油醚-95%乙醇(6:4,V:V)溶液,装入层析柱中,室温静置3小时。室温下用石油醚-95%乙醇(6:4,V:V)洗脱,获得提取液,流速为1.0 MV/h(MV为材料的饱和吸液量,作为提取液用量的最小体积单位)。收集材料3.2倍材料干重体积的提取液,藁苯内酯的提取率达到97%以上。提取实验按比例放大100倍,结果与小试一致,且有很好的重复性。Z-藁苯内酯的分离与纯化实验研究了萃取与硅胶柱层析结合纯化Z-藁苯内酯的方法。最佳纯化Z-藁苯内酯的工艺为:将提取液用三分之一体积的纯水萃取一次,十分之一体积的纯水、十分之一体积的石油醚萃取两次,石油醚相合并减压浓缩后得到Z-藁苯内酯粗品。再用硅胶柱层析分离并收集洗脱液减压去除洗脱液后,用10倍体积的石油醚溶解后用一半体积的硅胶吸附离心后得到纯度超过Z-藁苯内酯标准品的纯品。本研究建立了从川芎提取分离和纯化藁苯内酯新工艺。所用方法提取方法在常温下进行,操作简单,溶剂使用量少,提取效率高、分离纯化步骤少,是理想的制备Z-藁苯内酯的方法。此方法获得的藁本内酯的纯品为后期研究其对神经损伤保护功能活性的药理机制研究奠定了基础。
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