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本文主要分为两部分:一、大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)的分离、培养和鉴定目的:分离、培养和鉴定大鼠骨髓MSCs细胞方法:采用贴壁筛选法在含10%胎牛血清的DMEM/F12培养液中分离、培养BN大鼠骨髓MSCs。通过连续传代使细胞纯化。用流式细胞仪检测CD90和CD45表面抗原以鉴定MSCs。二、大鼠RPE细胞裂解液的制备及MSCs的体外诱导分化目的:制备RPE细胞裂解液,加入MSCs的培养体系,体外诱导MSCs向RPE细胞分化。方法:将成年大鼠眼球置于dispase溶液中浸泡2小时,操作显微镜下沿锯齿缘剪开眼球,取出眼球后节,置于含10%胎牛血清的DMEM/F12培养液中。吸管吹打使RPE细胞脱落,将RPE细胞悬液于-20℃和-4℃冻融2次,制成RPE细胞裂解液,每只眼球约可制备1.5ml。将RPE细胞裂解液按照70ul/cm2的量加入到已经接种MSCs的培养体系中,隔天更换培养液与裂解液。诱导9-10天后,MSCs生长接近汇合。通过免疫组化、免疫印迹法,双重免疫荧光标记、流式细胞术鉴定被诱导的细胞是否同时表达RPE细胞的特征性标记物细胞角蛋白(CK)与S-100。结论:本试验采用贴壁筛选法成功分离和培养了高纯度的大鼠骨髓间充质干细胞。MSCs经RPE细胞裂解液诱导后能够同时表达CK与S-100,证明经该方法诱导的MSCs能够向RPE细胞分化。