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背景与目的:在乳腺癌的发生发展过程中,有两条重要的信号通路,雌激素受体α介导的转录激活或抑制和snail家族锌指蛋白2-E-钙粘素-上皮间质转化,且通过ERα与Slug建立起交叉信号通路。 材料和方法:本实验分别采用免疫印迹法、RT-PCR研究在乳腺癌细胞株中Slug与ERα的蛋白及mRNA表达情况;利用免疫荧光实验研究在乳腺癌细胞株中Slug与ERα的细胞定位及表达情况;利用免疫组织化学方法检测50例乳腺癌组织标本中Slug与ERα表达情况。分别通过在乳腺癌细胞株MDA-MB-231、BT-549干扰Slug和在MCF-7、T47D过表达Slug后,采用western blot、RT-PCR来研究在乳腺癌细胞株Slug对ERα蛋白及mRNA的影响;分别通过在MDA-MB-231细胞株干扰Slug和在MCF-7、T47D过表达Slug后,对ERα的启动子的影响,初步探索Slug调控ERα的机制;通过脂质体共转染的方法建立稳定转染细胞系T47DpcDNA3.1和T47DSlug,无雌激素饥饿处理48小时后,加100%乙醇(溶媒剂)或tamoxifen,0、12、24、36、48、60、72h用CCK8实验测定细胞生长速度变化。建立稳定干扰Slug的MDA-MB231shNC和MDA-MB231shSlug用同样的方法加雌激素处理观察细胞生长速度变化。 结果: 1.在MCF-7、T47D、MDA-MB231、BT549、SKBR3中Slug蛋白及mRNA的表达与ERα负相关。 2.免疫荧光发现在T47D、MCF中,ERα荧光定位于细胞核,Slug在细胞中未见荧光标记;在MDA-MB231中,Slug荧光定位于细胞核,ERα未见荧光标记。 3.在乳腺癌病理组织标本中,ERα+/Slug+者有8例(16%)是,ERα+/Slug-者28例(56%),ER-/Slug+者8例(16%),ER-/Slug-者有6例(12%),p<0.05,R=-0.036,差异有统计学意义。 4.免疫印迹及RT-PCR分析显示ERα负向调控Slug。 5.双报告基因实验显示Slug作用于ERα的启动子。 6. Slug引起T47D的内分泌耐药,干扰Slug引起MDA-MB231对雌激素的反应性。 结论:Slug转录抑制ERα,引起乳腺癌的内分泌耐药。