应用大孔吸附树脂技术分离制备秃疮花中异紫堇碱

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大孔吸附树脂分离技术在我国于70年代就已开始进行应用于天然产物的分离纯化研究。经过多年的发展和积累,目前已经被广泛应用于中草药有效成分的提取分离纯化和食品工业等领域的工业化生产,大孔吸附树脂具有高吸附量、种类多样化、一定的吸附选择性、表面功能基可进行改变、化学稳定性好、成本低、易再生等优势,其应用价值越来越受到广泛关注。秃疮花为西北特色野生植物资源,其主要活性成分异紫堇碱(isocorydine)为阿普菲类生物碱,具有较好的抗癌、肿瘤干细胞靶向作用、解痉止痛作用,2003年国家药监局批准为处方药。本论文以秃疮花中的异紫堇碱为目标,通过大孔吸附树脂对于异紫堇碱的选择性吸附和解吸附行为研究,建立秃疮花中异紫堇碱的提取、分离、纯化工艺,确定工艺流程、分析方法和分离纯化工艺参数;建立异紫堇碱的工业生产工艺,并建立大孔吸附树脂对于生物碱类化合物异紫堇碱的吸附和解吸附作用机理,具体研究内容如下:一、采用甲醇超声提取法、甲醇回流提取法和酸水煎煮提取法三种不同提取方法的比较研究,确定酸水煎煮提取法为秃疮花中异紫堇碱的最佳提取方法,通过正交试验设计优化酸水回流提取异紫堇碱的最佳工艺条件为:料液比1:15(g/mL).1%的酸水溶液为溶剂,提取时间1h×3次。通过验证试验:在此条件下,从秃疮花中提取异紫堇碱的提取率为0.88%。二、选用16种大孔树脂研究其对异紫堇碱吸附分离纯化效果,通过静态吸咐/解吸附试验,以异紫堇碱的静态吸附率/解吸附率、吸附容量/解吸附容量为评价指标,考察大孔吸附树脂对异紫堇碱的吸附与解吸附性能,筛选对异紫堇碱具有最佳分离纯化效果的大孔树脂,结果表明LX28树脂对异紫堇碱具有较好的纯化性能。三、通过动力学吸附/解吸附试验、吸附等温线和吸附热力学试验,研究了异紫堇碱在树脂上的吸附和解吸附机制,准二级动力学方程可以用来较好的描述异紫堇碱在大孔树脂上的整个吸附过程,吸附动力学研究表明吸附过程的控速步骤与被吸附物质的浓度紧密相关,粒子内部扩散方程表明吸附过程存在多种扩散机制,吸附等温线研究中,Langmuir等温线可以更合理解释异紫堇碱吸附过程为单层覆盖吸附,Freundlich等温线结果也证明异紫堇碱在LX28树脂上的吸附是属于正常吸附,吸附热力学研究表明在所定温度条件下异紫堇碱在树脂上的吸附是自发可行的,吸附过程为放热过程,增加温度不利于吸附,因此整个吸附过程中低温有利于吸附,其中吸附过程中的主要作用力为物理吸附而非化学吸附,包括标准范德华力,氢键及异紫堇碱和树脂苯环之间的π-π共轭作用。四、研究大孔吸附树脂分离纯化异紫堇碱的方法,适宜的工艺条件如下:在25℃,上样溶液浓度3.82mg/mL,上样溶液pH为10。通过装有LX28树脂柱,上样体积和流速分别为20mL和1mL/min。解吸过程中,60mL的纯水先除去无吸附性和强极性的杂质,然后用80mL乙醇-水(60:40v/v)溶液除去被吸附的杂质,然后用60mL乙醇-水(70:30v/v)溶液解吸目标化合物异紫堇碱,解吸附溶液pH调为3,此时异紫堇碱以盐的形式存在,亲水性的异紫堇碱形态有利于其解吸附。通过一次吸附和解吸附过程,秃疮花提取液中的异紫堇碱纯度从最初9.19%达到85.34%,异紫堇碱的回收率可达68.64%。本论文首次利用大孔吸附树脂技术建立了从秃疮花中分离纯化其有效成分异紫堇碱的方法,为工业化大规模生产异紫堇碱原料药提供技术支撑,为西北特色植物秃疮花的开发利用提供一定的科学依据,为异紫堇碱及其衍生物的药理活性研究提供资源保障,也可以为单体天然产物的产业化提供示范。
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