鹅产蛋性能的低下一直是制约鹅产业发展的关键瓶颈。大量的研究表明家禽就巢在很大程度上影响其产蛋性能,但无论是就巢性状还是产蛋量性状遗传力均低,常规选育难度大。选择对繁殖性能有抑制作用的激素或因子与外源蛋白融合表达来增强其免疫原性,用此蛋白作为抗原来免疫动物,可诱发机体产生该种激素或因子的抗体,从而抑制或减弱该激素或因子的生理功能。该技术已在牛、羊和地方鸡等些低繁殖力的品种或品系得到广泛应用,并取得了显著成效。Inhibin-α(INH-α)通过对FSH的负反馈调节抑制动物繁殖力,PRL是引起家禽就巢最直接的激素,当家禽体内PRL含量升高到一定程度后,家禽就开始出现就巢表现;AMH是近年来发现的与家禽就巢相关的重要因子,AMH在就巢期高表达,与家禽就巢时有着丰富的小卵泡有关。基于此,本研究以产蛋量低,就巢性强的浙东白鹅为研究对象,运用原核表达技术获得INH-α,AMH及PRL三种融合蛋白,将此融合蛋白作为抗原去主动免疫鹅,诱导其产生对抗自身的抗体,探明INH-α,AMH及PRL的阻断对鹅繁殖力的作用效果,研究旨在揭示外源激素对鹅的生殖生理调控作用,为提高浙东白鹅的产蛋量提供一定的技术支撑。1、为获得鹅INH-α,AMH及PRL融合蛋白,分别克隆鹅INH-α,AMH及PRL基因CDS 区,并连入 PET-30a(+)载体 NdeⅠ/HindⅢ 酶切位点中,构建 PET-INHα,PET-AMH和PET-PRL表达载体。经SDS-PAGE电泳检测,当OD600=0.6-0.8时,IPTG终浓度为0.2 mM,15℃诱导16 h,成功获得相应蛋白,经过包涵体溶解,复性,蛋白纯化,Western Blot检测显示,INH-α融合蛋白大小约为42 kDa;AMH融合蛋白大小约为72 kDa;PRL融合蛋白大小约为30 kDa,分子量大小与理论大小相符,证明所表达的蛋白为鹅INH-α AMH及PRL融合蛋白。2、为探明主动免疫INH-α、AMH和PRL融合蛋白对浙东白鹅血浆中抗体及相关生殖激素含量的影响,分别将纯化的PET-INHα,PET-AMH和PET-PRL融合蛋白制成油乳剂疫苗,经肌肉注射免疫300日龄的浙东白鹅,ELISA测定结果显示,免疫INH-α,AMH及PRL融合蛋白可使浙东白鹅产生相应抗体,降低浙东白鹅体内AMH和PRL水平,提高体内LH水平,其中免疫INH-α融合蛋白10 d和40 d可显著提高鹅体内LH含量(P<0.05)。3、为揭示主动免疫INH-α、AMH和PRL融合蛋白对浙东白鹅繁殖性能影响,经行为学观察,免疫INH-α,AMH及PRL融合蛋白鹅初次就巢时间(24h内四次观察均在就巢的为就巢鹅)分别缩短10 d,4 d和1 d;就巢时长分别缩短12.5 d,3.5 d和8.5 d;新出现就巢鹅比例由25%降至8.33%,12.5%和8.33%;同时提高了等级前卵泡的数量,由平均76个增加至195个,114个和140个;40 d观察期的产蛋量分别增加0.5个/只,0.42个/只和1.34个/只,结果提示主动免疫INH-α AMH和PRL融合蛋白可在一定程度上降低鹅的就巢发生率,提高鹅的产蛋量,其中PRL融合蛋白效果最为显著。综上所述,成功构建PET-INHα,PET-AMH和PET-PRL表达载体,能够高效表达INH-α、AMH和PRL,经过变性,复性和纯化后获得相应融合蛋白。免疫PRL融合蛋白可降低浙东白鹅就巢发生率,提高鹅的产蛋性能;免疫INH-α融合蛋白虽可提高鹅体内LH含量,明显降低就巢发生率,缩短就巢时间,但仅部分提高鹅的产蛋性能;而免疫AMH融合蛋白也能在一定程度上提高鹅的产蛋量。