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纤维素酶随机水解纤维素主链的β-1,4-糖苷键,广泛应用在工业生产领域,利用自然界的可再生资源:纤维素和半纤维素。然而工业生产条件往往比较苛刻,使得纤维素酶的利用受到很大限制。除了筛选合适菌种外,利用计算机分子模拟方法对纤维素酶进行了分子改造设计和氨基酸突变试验验证突变酶的酶学性质的改变,成为了一种崭新的手段。
本课题在生物信息学设计的基础上,用定点突变技术对特异腐殖霉Humicola inslens的中性纤维素酶EGV进行氨基酸定点突变,构建了五个突变体S76A,P49(del),F70Y和叠加突变体APY,KR,并经过重组酵母工程菌的表达和酶活测定,结果表明,P49(del)的突变导致了突变酶的最适温度扩宽5度左右,且热稳定性提高20%左右。证实环区的改变对EGV的热稳定性提高的有效性推测是正确的。
本课题结合分子模建和蛋白质工程手段,筛选得到热稳定性提高的菌种。这一过程利用计算机辅助设计为突变体的理性设计提供了详细的结构基础,筛选出最合理的突变体,大大减少了实验和后期筛选的工作量,对其他借助生物信息学技术改造蛋白的尝试也有一定借鉴作用。