【摘 要】
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本实验以大肠杆菌酒石酸脱氢酶β亚基(TtdB)为研究材料，探索了其在体外的交联情况。首先利用PCR技术从大肠杆菌BL21中获取TtdB基因，克隆到PGM-T载体并测序；序列测定无误后连
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本实验以大肠杆菌酒石酸脱氢酶β亚基(TtdB)为研究材料，探索了其在体外的交联情况。首先利用PCR技术从大肠杆菌BL21中获取TtdB基因，克隆到PGM-T载体并测序；序列测定无误后连接到表达载体pTrcHisC，IPTG诱导表达。重组蛋白以包含体形式存在，应用TALON固定化金属亲和树脂以变性的方法纯化，通过分步透析逐步去除变性剂的方法复性，复性率可达70﹪。将复性后的蛋白与溶菌酶通过热诱导去折叠和氧化重折叠方法进行体外蛋白质分子交联实验。另外，本文还利用PCR定点突变技术将此TtdB基因的6个半胱氨酸全部突变为丝氨酸，突变后的重组蛋白在与野生型蛋白相同的热诱导去折叠条件下，完全没有二聚体和多聚体的形成。
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