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DREB1B转录因子能调控一组抗干旱、抗低温基因的表达,在植物传递胁迫耐受性上扮演重要的角色。而RD29A启动子中包含着干旱、高盐和低温响应顺式作用元件,仅在胁迫诱导下表达。已经有利用导入RD29A启动子驱动DREB1B转录因子来提高植物抗寒性、抗旱性,并且获得一定成功的报道,但在花卉植物上的应用还有待探讨。本实验拟通过克隆抗逆基因DREB1B及诱导型启动子RD29A.L和RD29A.S,构建表达载体pBI121-RD29A.L-DREB1B和pBI121-RD29A.S-DREB1B转化康乃馨、雏菊、三色堇等花卉植物而获得抗逆性强的花卉新品系,以便扩大其种植范围,延长开花时间,增加其经济效益。主要实验结果如下：1、拟南芥抗逆基因DREB1B和诱导型启动子RD29A的克隆及鉴定：根据Genebank中DREB1B全序列,设计含有XbaⅠ和SacⅠ酶切位点的引物,扩增长度为747bp；根据RD29A全序列,设计了两对引物扩增启动子序列,含有XbaⅠ和HindⅢ酶切位点,扩增长度分别为RD29A.L:1015bp, RD29A.S:548bp。经过PCR和RT-PCR反应,成功克隆到RD29A.L和RD29A.S长度不同的两种启动子和DREB1B,用于下一步的载体构建。2、pBI121-RD29A.L-DREB1B和pBI121-RD29A.S-DREB1B载体构建：pBI121载体、DREB1B、RD29A.L和RD29A.S分别进行同步双酶切,产物纯化后用T4 DNA连接酶连接,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,挑选单克隆进行菌落PCR、提质粒酶切和测序鉴定,确定RD29A启动子和DREB1B序列正确,可以发挥其相应功能。然后将重组子转入农杆菌GV3101感受态细胞,经鉴定成功构建了表达载体pBI121-RD29A.L-DREB1B和pBI121-RD29A.S-DREB1B。3、康乃馨和雏菊离体再生体系的建立：以下胚轴和腋芽作为外植体,通过愈伤组织、不定芽和不定根的诱导,成功建立了康乃馨的再生体系。以叶片作为外植体,在MS+1.0mg/L 6-BA+0.3mg/L NAA培养基上诱导产生了雏菊的不定芽,生根培养正在进行中。由此,我们成功构建了pBI121-RD29A.L-DREB1B和pBI121-RD29A.S-DREB1B真核表达载体,并逐步建立了花卉植物的再生体系,这为下一步农杆菌介导的RD29A.L-DREB1B和RD29A.S-DREB1B基因的遗传转化以及筛选出具有抗寒、抗旱、抗盐功能的花卉新品系奠定了基础。