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熊果酸是一种五环三萜类物质,具有明显的抗肿瘤、抗氧化、抗炎、保肝、降血脂作用。目前较难合成,一般以从生物质内提取为主。本文研究讨论了从白花蛇舌草中分离提纯熊果酸的工艺。 建立了白花蛇舌草提取物中熊果酸的分析方法。采用薄层层析法进行定性分析,分析条件为:以甲苯:乙酸乙酯:冰醋酸=20:4:0.6为展开剂,硅胶G板为固定相,碘蒸气为显色剂。用反相高效液相色谱法进行定量分析,分析条件为:以甲醇:水:冰醋酸=85:15:0.3为流动相,C18柱为固定相,流速为0.6ml/min,进样量为10μl,检测波长为210nm,柱温为30℃。 采用溶剂法粗提熊果酸。以乙醇为提取溶剂,通过单因素实验及正交实验,获得的最佳提取条件是:95%乙醇溶液在回流温度下提取两次,每次1.5h,液固比为8:1。由提取实验测得实验用白花蛇舌草中含熊果酸3.57×10-3（g/g）。而上述条件下熊果酸的提取率可达95%左右,提取物中熊果酸的含量约为2.5%。 用溶剂法对提取后的熊果酸进行初步纯化。先用液固比10（v/m）的石油醚对粗提浸膏进行三次脱脂,再用氯仿以1:1的料液比萃取两次。然后用酸碱沉淀法即通过调节提取物醇溶液的pH值来进一步纯化熊果酸,最佳条件为首先将样品的醇溶液用10%的NaOH溶液碱化至pH11左右,加热,搅拌静置,过滤;将滤液用10%的HCl溶液酸化至pH为2,再用同样酸度的水溶液稀释一倍,静置,过滤,再用水洗沉淀至中性,真空干燥。最后所得产品含量可达36%左右,回收率在72.6%左右。 本文还考察了柱层析精制工艺,通过单因素考察获得的最佳层析条件为以80～120目的硅胶为固定相,流动相为氯仿～甲醇体系,梯度洗脱,洗脱速度以0.8BV/h为宜,洗脱时温度控制在25℃。通过柱层析,产品中熊果酸的纯度可由过柱前的36%提高到65%以上。另外还初步摸索了产品的结晶工艺。 最后对通过MTF法考察了本文得到的产品对细胞K562/ADM增殖抑制作用,发现有明显的细胞毒作用。