鸡IgY轻链可变区(ScV<,L>)基因T7 PDT文库构建

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鸡的免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)有三种:IgY、IgM和IgA。IgY与哺乳动物IgG的抗病功能相同,但结构上存在差异,IgY重链上没有铰链结构。IgY由两条重链(Heavy Chain,H)和两条轻链(Light Chain,L)构成。各有一个可变区(Variable Region,V)位于H和L的N端,称为V_H和V_L。与抗原表位(Epitope)特异结合的区域就位于V上,由V_H和V_L的三个抗原互补决定区(Complementarity-determining regions,CDR)共同形成。研究表明,编码IgY V_L的基因是V_λ-J_λ。鸡IgY L的多样性是在鸡法氏囊发育期间依靠基因转换(Gene conversion)形成。以后在抗原刺激下发生体细胞多样化(Somatic Diversification)而获得高亲和力(Affinity)。 鸡与哺乳动物进化距离大。因此鸡对哺乳动物体内的抗原物质容易产生强免疫应答,产生出针对哺乳动物纽胞抗原的高亲和力IgY。鸡血清中的IgY先转移到蛋黄中储存,胚胎发育时又从蛋黄中进入鸡胚血液。利用多次免疫接种技术可以获得高效价特异IgY的高免鸡蛋,可以采用生化技术从中制备大量的纯IgY。许多研究证明,鸡IgY特异性高,亲和力可与鼠源单抗媲美,稳定性好(在70℃以下和pH4以上活性稳定)。高免鸡蛋生产简便,批量大,无须采血,符合动物福利。因此,利用蛋鸡大量生产特异IgY的技术(IgY Technology)倍受重视,已有产品上市。 鸡IgY技术存在不足之处。(1)鸡病太多,尤其禽流感等人禽共患病给鸡IgY产品安全性带来了影响,专家们呼吁要用SPF鸡生产IgY。不难想象,其成本很高,在动物药品市场上缺乏竞争力。(2)抗原量大(多次免疫),有些抗原对鸡群健康有危害。(3)鸡IgY具有强抗原性,在哺乳动物上应用时受抗抗体和血清病影响,难以发挥作用。 McCafferty(1990)首次报道出利用PDT构建抗体基因文库。由于抗体蛋白表达于噬菌体的表面,采用抗原抗体特异结合的亲和淘洗技术可以获得抗体基因的重组噬菌体克隆。从这些克隆中提取抗体基因可以在酵母细胞中高效表达和工业化生产。重组噬菌体技术能有效的模仿免疫多样性和选择性的特征,能很容易的通过测序、突变和筛选来提高重组噬菌体抗
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