[研究背景]随着B超、CT、MRI等影像学技术的发展与应用及临床诊断水平的提高,原发性肾上腺肿瘤的检出率也明显提高。肾上腺肿瘤己经被认为是人类最常见的肿瘤之一,也越来越被临床医生所重视。肾上腺肿瘤往往都具有内分泌功能,肿瘤分泌的过量的肾上腺激素引起人体相应的内分泌功能的紊乱,表现为高血压、库欣综合征、肥胖等,短期内即可引起严重的心血管的损害,如心肌肥厚、脑血管意外、冠心病等。大多数肾上腺的恶性肿瘤也具有内分泌功能,早期具有与肾上腺良性肿瘤相似的临床表现,此外,还表现为男性化、女性化、副瘤综合征等。尽管大多数的肾上腺肿瘤都是良性肿瘤,但是临床上绝不能忽视肾上腺恶性肿瘤,其对人体的危害远远大于良性肿瘤。。肾上腺良恶性肿瘤的预后差别极大,良性肿瘤经手术切除可以根治,而恶性肿瘤往往易于发生复发和转移。恶性肿瘤常常表达多种耐化疗药物基因,化疗效果很差,对放疗也不敏感。放化疗对肿瘤病人的治疗和改善生存率帮助不大,目前对于肾上腺的恶性肿瘤主要治疗方法是手术切除。’肾上腺良、恶性肿瘤早期的临床表现相似、影像学上无特征性的表现,鉴别诊断十分困难。由于肾上腺皮质癌的组织结构与形态和肾上腺皮质腺瘤相像,常规病理也很难鉴别,有时需结合临床表现、大体、镜下组织学形态和免疫组化综合判断。30%-85%的肾上腺皮质癌病人诊断时已有远处转移,对于无功能性肾上腺皮质癌诊断时远处转移率更高,很多病人诊断时已失去了手术机会。相比肾上腺皮质癌,肾上腺恶性嗜铬细胞瘤的诊断更为困难,常规病理检查亦不能区分嗜铬细胞瘤的良恶性,只有出现转移病灶才能诊断为恶性嗜铬细胞瘤。因此,尽早鉴别良恶性肿瘤,早期诊断和治疗肾上腺恶性肿瘤,对改善肿瘤患者的预后十分重要。由于在影像学上及组织学上均难以鉴别肾上腺肿瘤的良恶性,因此非常有必要从分子水平上对肾上腺肿瘤进行研究,探讨其生物学行为,为临床诊断、治疗及判断预后提供理论依据。间隙连接(gap junction, GJ)普遍存在于脊椎动物体内,是细胞连接中的一种,由相邻细胞膜上的间隙连接蛋白(connexin Cx)构成。Cx43是第一个被克隆的Cx,目前为止,研究发现小鼠体内有20种connexin基因,人体内有21种connexin基因,其中19对为直系同源基因。间隙连接蛋白在人体各种组织均有表达,如心脏、血管、内分泌腺、外分泌腺、肌肉、神经组织等。但是,Cx的表达分布在不同的外界条件刺激和病理状态下会有所改变。通过间隙连接相邻细胞电信号的可以直接传递,营养物质、代谢产物、离子、第二信使、分子量小于1000道尔顿的亲水性物质的也可以通过间隙连接进行交换。间隙连接介导的细胞连接通讯(Gap Junction Intercellular Communication GJIC)对细胞的新陈代谢、内环境稳定、增殖和分化等生理过程起着重要的调控作用。不同组织内的间隙连接具有不同的功能,其功能可分为两个方面GJIC非依赖型和GJIC依赖型,前者以Cx单体(未配对的Cx)在细胞内发挥作用；后者是两个细胞或多个相邻细胞的Cx单体耦合形成GJIC,通过GJIC发挥作用。研究证实间隙连接蛋白功能主要包括以下几个方面：①电偶联作用：在细胞间传递电信号,促使动作电位的发生。②细胞通道作用：相邻细胞间的离子、营养物质、液体、代谢产物可以迅速交换。③调控细胞的生长和分化,参与细胞的黏附和运动,与肿瘤的发生、发展、转移有关。④在胚胎的生长、发育中调节细胞间信号的传递。Cx基因的变异与人类多种疾病有密切关系,如心血管疾病、神经系统疾病、先天性耳聋、多种皮肤疾病等。人们利用电子显微镜、免疫组化、蛋白印迹、PCR等多种实验手段发现人类多种恶性肿瘤存在着间隙连接蛋白的表达异常和间隙连接通讯功能的缺陷。通过转染使细胞间隙连接蛋白表达及间隙连接通讯的恢复可以抑制肿瘤生长甚至逆转恶性肿瘤,间隙连接蛋白基因表现出抑癌基因的特点。研究证实间隙连接蛋白(Cx)表达异常与肿瘤的增殖、侵袭、转移有密切关系。然而,间隙连接蛋白在原发性肾上腺肿瘤的表达国内未见报道,研究肾上腺肿瘤中间隙连接蛋白的表达情况,探讨其与肿瘤生物学特征的关系有助于通过间隙连接蛋白的变化来鉴别肾上腺良恶性肿瘤,有可能为肾上腺恶性肿瘤的治疗提供新的思路。[目的]1、探讨间隙连接蛋白26、32、43在原发性肾上腺肿瘤的表达情况。2、探讨间隙连接蛋白26、32、43在原发性肾上腺肿瘤表达的相互关系。3、探讨间隙连接蛋白26、32、43在原发性肾上腺肿瘤的临床诊断及预后评估中的价值。[内容和方法]以1990年4月份～2010年12月份在广州军区广州总医院住院经开放或腹腔镜手术的91例典型的肾上腺肿瘤患者为研究对象,收集其术后石蜡包埋的组织标本,结合病理报告和临床资料证实其中肾上腺皮质腺瘤45例、肾上腺皮质癌14例、嗜铬细胞瘤26例、恶性嗜铬细胞瘤瘤6例。21例正常肾上腺组织均来自于用于肾移植的尸体肾的肾上腺。以正常肾上腺为正常对照、PBS代替一抗作阴性对照,应用免疫组织化学NovolinkTM Polymer法检测112例标本中Cx26、Cx32、Cx43的表达水平,每组切片均选一张行HE染色,正常肾上组织均行HE染色,以排除其他病理改变。运用统计学方法对肾上腺肿瘤中Cx26、Cx32、Cx43的表达情况进行处理,并分析患者性别、年龄、皮质癌的临床分期及患者预后与Cx26、Cx32、Cx43的关系,同时对三种间隙连接蛋白相关性进行分析。采用SPSS13.0软件进行统计学分析。多分组等级资料采用Kruskal-Wallis H检验,两组等级资料的比较采用Mann-Whitney U检验；各因素间的相关性用Spearmen等级相关分析进行。在进行Cox模型分析前,先用Log-Rank检验对单因素分析,然后将有统计学意义的单因素纳入Cox成比例风险回归模型进行分析,以P<0.05为差异有统计学意义。[结果]1.Cx26.Cx32.Cx43在正常肾上腺、肾上腺皮质腺瘤、肾上腺皮质腺癌表达的阳性强度均有显著性差异(χ2=21.366,P=0.000； χ2=17.509,P=0.000；χ2=22.645,P=0.000),Cx26、Cx32、Cx43在肾上腺皮质腺癌的阳性表达强度依次低于肾上腺皮质腺瘤和正常肾上腺。Cx26在正常肾上腺、嗜铬细胞瘤、恶性嗜铬细胞瘤组表达的阳性强度有显著性差异(χ2=43.717,P=0.000),Cx26在恶性嗜铬细胞瘤的阳性表达强度最高,在嗜铬细胞瘤的表达强度最低。Cx32、Cx43在嗜铬细胞瘤和恶性嗜铬细胞瘤均呈阴性表达。2. Cx32.Cx43在肾上腺皮质癌的表达呈正相关(r=0.646,P=0.013),Cx26、Cx32在肾上腺皮质癌的表达无相关性(r=0.356,P=0.212),Cx26、Cx43在腺皮质癌的表达呈无相关性(r=0.392,P=0.165)。Log-Rank单因素分析显示年龄、临床分期、Cx43的阳性表达是皮质癌患者生存时间的影响因素。3、Cx43是影响原发性肾上腺皮质癌的预后的独立因素(B=-1.962,P=0.030),Cx43表达阳性的患者比表达阴性的患者预后要好。[结论]1、检测Cx26、Cx32和Cx43的表达对鉴别良、恶性肾上腺皮质肿瘤具有重要参考意义。2、检测Cx26的表达对鉴别恶性嗜铬细胞瘤和嗜铬细胞瘤有重要价值。3、Cx43在原发性肾上腺皮质癌组织的表达与患者预后呈负相关,Cx43阳性患者的预后较阴性患者好。