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背景S100 钙离子结合蛋白 A8(S100 calcium binding protein A8,S100A8)和 S100钙离子结合蛋白A9(S100 calcium binding protein A9,S100A9)均为钙结合蛋白S100家族成员。S100A8和S100A9被认为在肿瘤细胞的增殖、凋亡、分化、侵袭及转移等过程中均发挥重要的调节作用。但有关S100A8和S100A9与鼻咽癌发生、发展及预后之间关系尚未见到相关报道。目的(1)分析S100A8、S100A9在鼻咽癌组织中的表达水平及与临床病理、预后的关系,为鼻咽癌的治疗寻找新的靶点。(2)研究鼻咽癌细胞中S100A8、S100A9与核转录因子(NF)-κB、β-catenin、基质金属蛋白酶-7(MMP7)、MMP9、MMP12、肿瘤坏死因子(TNF)-α等基因的相关性,阐述S100A8、S100A9在鼻咽癌细胞发生、发展过程中作用机制。(3)研究S100A8、S100A9对鼻咽癌细胞增殖、细胞侵袭及运动特性、细胞凋亡的影响,揭示S100A8、S100A9对鼻咽癌细胞侵袭能力的影响及作用机制。方法(1)收集2008年1月-2011年12月在武汉大学人民医院耳鼻喉科行活检初次确诊的92例鼻咽癌患者的癌组织标本,并收集患者临床病理、生存期等资料,另收集同期92例慢性鼻咽炎患者炎性组织标本作为对照组,采用免疫组织化学方法检测两组标本中S100A8、S100A9的表达量,分析S100A8和S100A9表达水平与患者临床病理、生存期的关系。(2)构建S100A8和S100A9的重组RNAi载体及过表达载体,转染至人鼻咽癌CNE-2细胞系,提取总RNA,采用RT-PCR及Western blot检测不同处理组CNE-2 细胞中 S100A8、S100A9、NF-κB、β-catenin、MMP7、MMP9、MMP12、TNF-α的表达量。(3)将构建S100A8和S100A9的重组RNAi载体及过表达载体转染至人鼻咽癌CNE-2细胞系,MTT法检测不同处理组细胞增殖情况,统计各组细胞倍增时间,Transwell体外细胞侵袭试验检测各组细胞侵袭性,划痕试验观察各组细胞的运动情况,流式细胞术检测各组细胞凋亡变化情况。结果(1)鼻咽癌组织中S100A8和S100A9阳性表达率分别为52.17%和72.83%,鼻咽炎性组织中的阳性表达率分别为17.39%、36.96%。鼻咽癌组织中S100A8和S100A9表达与患者的性别和年龄无相关性(P>0.05),而与分化程度、TNM分期及淋巴结转移呈现密切的相关性(P<0.05)。鼻咽癌组织中S100A8与S100A9表达呈明显的正相关(r=0.393,P=0.000)。S100A8和S100A9表达高的鼻咽癌患者临床病理分期更晚,生存期更短。(2)倒置荧光显微镜下观察显示各组细胞均转染成功。S100A8-RNAi组、S100A9-RNAi 组细胞中 NF-κB、β-catenin、MMP7、MMP9、MMP12、TNF-αmRNA及蛋白的表达水平均较对照组明显下降,S100A8过表达组、S100A9过表达组细胞中 NF-κB、β-catenin、MMP7、MMP9、MMP12、TNF-α mRNA及蛋白的表达水平均较对照组明显上升。(3)S100A8-RNAi组及S100A9-RNAi组24h、48h、72h的细胞数量明显低于对照组,细胞倍增时间延长,S100A8过表达组及S100A9过表达组24h、48 h、72 h的细胞数量明显多于对照组,细胞倍增时间缩短。S100A8过表达组及S100A9过表达组穿过Transwell膜的细胞数量均明显高于对照组。S100A8-RNAi 组及 S100A9-RNAi 组鼻咽癌 CNE-2 细胞转染后 24 h、48 h、72 h的凋亡率明显高于对照组,而S100A8过表达组及S100A9过表达组细胞凋亡率明显低于对照组。结论(1)组织中S100A8和S100A9表达水平高的鼻咽癌患者临床病理分期更晚,生存期更短。(2)S100A8 和 S100A9 具有促进鼻咽癌 CNE-2 细胞 NF-κB、β-catenin、MMP7、MMP9、MMP12、TNF-α分泌的作用。(3)S100A8和S100A9具有促进鼻咽癌CNE-2细胞的增殖、侵袭、运动特性及抑制凋亡作用。