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菠萝蜜(Artocarpus heterophyllus Lam.),桑科波罗蜜属,是典型的热带水果,其果皮质量约占全果的40%,不可食用,可作牛的饲料或喂鱼,但大量被丢弃成为农业废料,造成较大的资源浪费和环境污染。菠萝蜜果皮中含有矿物质、β胡萝卜素和膳食纤维等丰富的营养成分,还含有多酚、黄酮以及生物碱等活性物质。植物多酚具有抗氧化、抗微生物、调血脂等生物功效。在医药、保健品、化妆品等行业中显示出巨大的应用价值。本文以菠萝蜜果皮为对象,建立菠萝蜜果皮中多酚的提取分离方法,为菠萝蜜果皮的再利用及天然多酚新原料的开发提供理论基础。研究了菠萝蜜果皮多酚的提取工艺以及大孔树脂和葡聚糖凝胶柱色谱技术对菠萝蜜果皮多酚的分离纯化效果,并采用紫外光谱法、高效液相色谱质谱联用和核磁共振波谱法进行结构鉴定,同时研究了菠萝蜜果皮多酚对DPPH自由基的清除活性和酪氨酸酶抑制活性。试验结果如下:(1)采用超声波法提取菠萝蜜果皮多酚,考察了乙醇体积分数、液料比、提取温度、提取时间和超声功率5个单因素对多酚得率的影响,在单因素试验的基础上运用Box-behnken中心组合试验对菠萝蜜果皮多酚超声波提取工艺进行优化,得到的最优提取工艺条件为:乙醇体积分数66%、提取温度41℃、液料比27:1(mL/g),在此条件下,菠萝蜜果皮多酚的得率为2.24%,与理论预测值相近。(2)筛选出NKA-2树脂作为分离纯化菠萝蜜果皮中多酚类物质的合适树脂。通过考察上样多酚质量浓度、洗脱剂乙醇体积分数等7个因素对树脂吸附和解析效果的影响,得到NKA-2树脂对菠萝蜜果皮中多酚类物质纯化的最佳工艺为:上样多酚质量浓度0.4 mg/mL,上样液体积145 mL,上样流速3 mL/min,洗脱剂蒸馏水用量250mL,洗脱剂乙醇的体积分数70%,洗脱剂用量145 mL,洗脱流速3 mL/min。验证试验表明,菠萝蜜果皮多酚回收率为75.64%。纯化前后,总酚含量从27.33 mg/g提高到65.59 mg/g,提高了2.39倍。纯化前多酚对DPPH自由基的清除率为75.35%,纯化后为89.53%,表明NKA-2大孔树脂对菠萝蜜果皮多酚起到了很好的富集效果。(3)通过紫外-可见光谱分析,确定菠萝蜜果皮多酚中含有原花青素类化合物,进一步对多酚进行分离纯化后进行液相色谱-质谱连用和核磁共振波谱分析,从NKA-2大孔树脂的70%乙醇洗脱液和100%乙醇洗脱液中鉴定出两种化合物,分别为3,4-二羟基苯甲酸和邻苯二甲酸二丁酯。此外,从质谱图中推测菠萝蜜果皮多酚中可能还含有A型原花青素二聚体、B型原花青素二聚体、绿原酸等酚类物质,但由于纯化样品中目标化合物的量不足以进行核磁波谱分析,因此无法进一步探究其分子结构,确定以上推测。(4)试验结果表明,菠萝蜜果皮多酚和对照品维生素C清除DPPH自由基的IC50值分别为0.031和0.11 mg/mL,各萃取物对DPPH自由基清除率大小为:水部>正丁醇部>乙酸乙酯部>粗提物>二氯甲烷部>石油醚部,表明菠萝蜜果皮中的抗氧化活性物质主要集中在水相。菠萝蜜果皮多酚质量浓度与酪氨酸酶活性抑制率存在显著相关性(P<0.01),相关系数为0.972。菠萝蜜果皮多酚和对照品曲酸抑制酪氨酸酶活性的IC50值分别为158.85μg/mL和18.97μg/mL,水部、正丁醇部和乙酸乙酯部的酪氨酸酶抑制率分别为69.78%、59.52%、54.37%,抑制率较高,二氯甲烷部、石油醚部和粗提物对酪氨酸酶有抑制作用不强。