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在水产动物养殖过程中,由于养殖技术低下、养殖管理不规范等,常可造成养殖水体中亚硝酸态氮的大量累积,从而严重影响养殖动物的正常生长、代谢和生存。本论文以刺参(Apostichopus japonicus Selenka)为研究对象,围绕刺参生长和生理水平对于亚硝酸氮胁迫响应,主要研究了刺参分别在急性和慢性亚硝酸氮胁迫下,生长、能量代谢、免疫应答、热休克蛋白70表达、同工酶谱的变化规律,并从生理生化和细胞水平两方面,初步探讨了刺参对亚硝酸氮胁迫的应答机制,其主要结果如下:1.慢性亚硝酸氮胁迫对刺参生长、呼吸代谢及能量代谢关键酶活性的影响在实验室条件下,研究了不同亚硝酸氮浓度(1.95、3.52、6.25、10.94和19.54mg/L)慢性胁迫(30d)对刺参(湿重50.63±0.72g)生长、呼吸代谢及能量代谢酶活性的影响。实验结果表明,不同浓度亚硝酸氮胁迫对刺参生长、呼吸代谢及不同组织(体腔液、体壁和肌肉束)的能量代谢酶,包括:己糖激酶(HK)、丙酮酸激酶(PK)、乳酸脱氢酶(LDH)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、苹果酸脱氢酶(MDH)、葡萄糖(GLU)、乳酸(LD)、糖原(Glycogen)影响显著。亚硝酸氮慢性胁迫对刺参生长影响显著(P <0.05),刺参的特定生长率(SGR)随亚硝酸氮胁迫浓度的增加而随降低。实验期间,不同亚硝氮浓度处理组刺参耗氧率随着亚硝酸氮胁迫时间的延长呈先升高再降低的趋势。当亚硝酸氮胁迫12d时,刺参耗氧率达到最大值。在不同浓度亚硝酸氮胁迫下,刺参不同组织HK、PK、LDH、SDH、MDH活性和及GLU含量基本呈现先升高后降低的变化趋势,而LD和糖原含量基本呈先降低后升高的变化趋势。2.慢性亚硝酸氮胁迫对刺参免疫酶及热休克蛋白70表达的影响在实验室条件下,研究了不同亚硝酸氮浓度(0.12、2.30、11.50和57.50mg/L)慢性胁迫对刺参(湿重48.96±0.88g)体壁非特异性免疫能力及热休克蛋白(HSP70)表达的影响。结果表明,不同浓度亚硝酸氮胁迫对刺参体壁酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、溶菌酶(LSZ)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性以及总抗氧化能力(T-AOC)、微量丙二醛(MDA)含量和热休克蛋白70表达量影响显著。刺参在0.12-57.50mg/L浓度亚硝酸氮胁迫下,体壁中ACP、AKP、T-AOC以及LSZ活性均在胁迫初期显著升高,到第20d时,57.50mg/L亚硝酸氮胁迫组刺参体壁中ACP、AKP、T-AOC及LSZ活性均显著低于对照组;低浓度亚硝酸氮(0.12和2.30mg/L)胁迫能够显著提高刺参体壁SOD、CAT的活性,而高浓度亚硝酸氮(11.50和57.50mg/L)胁迫则显著抑制刺参体壁SOD和CAT的活性;刺参体壁中MDA含量随亚硝酸氮胁迫浓度的升高而升高,且随胁迫时间的延长在体壁中的积累量增大;刺参体壁中HSP70的表达量在亚硝酸氮胁迫初期迅速升高至最高,但随胁迫时间的延长而降低并趋于稳定,其最大表达量与亚硝酸氮浓度呈显著相关关系。本研究表明,刺参在低于2.30mg/L亚硝酸氮胁迫下,体内非特异性免疫酶能主动发挥作用;但在较高浓度亚硝酸氮胁迫下,体内非特异性免疫能力显著下降;HSP70的表达量可以较好反映刺参受亚硝酸氮胁迫的程度。3.急性亚硝酸氮胁迫对刺参免疫酶及热休克蛋白表达的影响在实验室条件下,研究了不同亚硝酸氮浓度(79.43、128.82、208.93、338.84、549.54和891.25mg/L)急性胁迫对刺参(湿重48.96±0.88g)体壁非特异性免疫能力及热休克蛋白(HSP70)表达的影响。结果表明,不同浓度亚硝酸氮胁迫对刺参体壁酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、溶菌酶(LSZ)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性以及总抗氧化能力(T-AOC)、微量丙二醛(MDA)含量和热休克蛋白70表达量影响显著。刺参在128.82-891.25mg/L浓度亚硝酸氮胁迫下,体壁中ACP、AKP、T-AOC以及LSZ活性均在胁迫初期显著升高;79.43和128.82mg/L亚硝酸氮胁迫能够显著提高刺参体壁SOD、CAT的活性,而高于208.93mg/L亚硝酸氮胁迫则显著抑制刺参体壁SOD和CAT的活性;刺参体壁中MDA含量随亚硝酸氮胁迫浓度的升高而升高,且随胁迫时间的延长在体壁中的积累量增大;刺参体壁中HSP70的表达量在亚硝酸氮胁迫初期迅速升高至最高,但随胁迫时间的延长而降低并趋于稳定,其最大表达量与亚硝酸氮浓度呈显著相关关系。4.亚硝酸氮胁迫对刺参不同组织几种同工酶表达的影响采用不连续的聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳法,对不同亚硝酸氮浓度急性和慢性胁迫刺参3种组织(体壁、呼吸树、肠)的酯酶同工酶(EST)、苹果酸脱氢酶同工酶(MDH)、超氧化物歧化酶同工酶(SOD)进行了分析比较。结果表明:经亚硝酸氮胁迫后,刺参体内各组织的同工酶酶谱出现明显的变化,在不同浓度和不同胁迫时间下存在显著的差异,并具有明显的组织差异性。经检测,不同的同工酶酶谱变化规律不同,刺参经急、慢性亚硝酸氮急、慢性胁迫后,EST酶谱变化较复杂,而MDH、SOD酶谱则比较稳定。当刺参受到亚硝酸氮胁迫时,可引起刺参体内无氧代谢加强,有氧代谢、脂类降解代谢、抗氧化能力减弱,正常的物质代谢平衡和免疫能力被破坏,因此供给刺参机体的能量减少,刺参机体抵抗胁迫环境的能力降低,甚至诱发刺参疾病的发生或导致刺参大批死亡。