【摘 要】
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目的构建幽门螺杆菌(Helicobacterpylori，Hp)cagA基因片段的原核表达系统和建立ELISA检测CagA及其抗体，了解表达CagA的Hp菌株(CagA+Hp)感染与所致疾病种类的关系。 方法从快
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目的构建幽门螺杆菌(Helicobacterpylori，Hp)cagA基因片段的原核表达系统和建立ELISA检测CagA及其抗体，了解表达CagA的Hp菌株(CagA+Hp)感染与所致疾病种类的关系。
方法从快速尿素酶试验阳性的162例患者胃粘膜活检标本中分离Hp。采用PCR检测112株HpcagA基因，并从临床菌株W05中扩增2148bp的cagA基因片段(cagA1)。构建cagA1原核表达系统，用SDS-PAGE检查目的重组蛋白(rCagA1)的表达情况，用Westernblot和免疫双扩散试验鉴定rCagA1的免疫反应性和抗原性。建立ELISA检测112株HpCagA表达和相应患者血清中CagA抗体。分析CagA+Hp感染与胃炎和消化性溃疡的关系。
结果80.9％胃粘膜活检标本中分离出Hp(131/162)，97.3％的Hp菌株(109/112)cagA基因阳性。与文献报道比较，所克隆的cagA1片段核苷酸和氨基酸序列同源性分别为94.83％和93.30％。所构建的原核表达系统表达的rCagA1量约为细菌总蛋白的30％。rCagA1能与Hp全菌抗体发生结合反应，免疫家兔能产生双扩效价为1：4的抗体。92.9％菌株(104/112)可表达CagA，88.4％患者(99/112)血清CagA抗体阳性。消化性溃疡标本中分离的Hp菌株CagA+阳性率(97.9％)高于胃炎标本中的Hp(88.5％)，但无统计学差异(x2=3.48，P＞0.05)。
结论本文构建的原核表达系统表达的rCagA1有良好的免疫反应性和抗原性，所建立的ELISA可用于HpCagA及其抗体的检测。所分离的Hp菌株cagA基因携带率和CagA表达率均很高，CagA+Hp感染与所致疾病种类无明显关系。
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