【摘 要】
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目的:本研究旨在探究:1.明确miR-6883-5p可否在乳腺癌中调控CDK4的表达;2.细胞层面探究miR-6883-5p在乳腺癌中的生物学功能及其调控作用机制通路;3.从组织层面研究miR-6883-5p的表达水平,评估其与临床病例相关性。方法:1.用miRBase、Targetscan、Pic Tar三个预测软件进行靶点预测,预测出来的靶基因取其交集,最终将miR-6883-5p作为后续实验
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目的:本研究旨在探究:1.明确miR-6883-5p可否在乳腺癌中调控CDK4的表达;2.细胞层面探究miR-6883-5p在乳腺癌中的生物学功能及其调控作用机制通路;3.从组织层面研究miR-6883-5p的表达水平,评估其与临床病例相关性。方法:1.用miRBase、Targetscan、Pic Tar三个预测软件进行靶点预测,预测出来的靶基因取其交集,最终将miR-6883-5p作为后续实验研究对象。2.运用脂质体转染的方法,分别将miR-6883-5p类似物（mimic）、miR-6883-5p抑制剂（inhibit）、miR-6883-5p阴性对照（NC）转入乳腺癌细胞,实时定量荧光PCR检测转染效率。3.Western blot验证乳腺癌细胞株中miR-6883-5p表达的变化对CDK4表达的影响。4.实时定量荧光PCR检测正常乳腺上皮细胞系（MCF-10A）、乳腺癌细胞（MCF-7、MDA-MB-453、MDA-MB-231、Bcap-37）等五种细胞中miRNA-6883-5p的表达水平,选择表达倍数差异明显的MDA-MB-231、MCF-7进行后续实验。5.cck8实验检测调控miR-6883-5p的表达后对乳腺癌细胞株增殖能力的影响。6.transwell小室实验验证调控miR-6883-5p的表达对乳腺癌细胞的迁移、侵袭能力的影响。7.流式细胞术验证调控miR-6883-5p的表达对乳腺癌细胞株细胞周期分布,凋亡能力的影响。8.收集山西医科大学第一医院乳腺外科2018年-2020年33例行乳腺癌改良根治术患者的部分癌组织（0.5*0.5*0.2cm,80-100g）及癌旁正常组织（大约癌旁2cm）,以及完整的病历资料。运用荧光定量pcr的方法对比探究33例样本的癌组织和癌旁组织中miRNA-6883-5p的相对表达,分析miRNA-6883的表达和临床病例因素的相关性。结果:1.miRNA-6883-5p是CDK4的调控因子,转染miRNA-6883-5p的模拟物（mimic）后,CDK4的表达升高;转染miRNA-6883-5p的抑制物（inhibit）后,CDK4的表达降低。2.乳腺癌细胞MCF-7,MDA-MB-453,MDA-MB-231,Bcap-37中miRNA-6883-5p的表达水平均高于乳腺上皮细胞系MCF-10A。3.cck8实验检测结果:下调miR-6883-5p表达,两种乳腺癌细胞生长速度较对照组均降低（P<0.05）;上调miR-6883-5p表达,两种乳腺癌细胞生长速度较对照组均升高（P<0.05）。4.transwell小室实验结果:下调miR-6883-5p表达,抑制乳腺癌细胞的迁移、侵袭能力（P<0.01）;上调miR-6883-5p表达,能够增强乳腺癌细胞的迁移、侵袭能力（P<0.01）。5.细胞周期实验结果:乳腺癌细胞株MDA-MB-231中过表达或敲降miR-6883-5p,对细胞周期分布无影响（P>0.05）。MCF-7中,过表达miR-6883-5p,对细胞周期分布无影响（P>0.05）;下调miR-6883-5p表达,细胞周期分布出现差异,G1期细胞所占比例增多,S+G2期所占比例减少（P<0.05）。6.细胞凋亡实验结果:在乳腺癌细胞株MDA-MB-231中过表达miR-6883-5p,细胞凋亡数量比对照组减少（P<0.01）;抑制miR-6883-5p,细胞凋亡数量比对照组增多（P<0.01）。乳腺癌细胞株MCF-7中过表达miR-6883-5p,细胞凋亡数量比对照组减少（P<0.05）;敲降miR-6883-5p,细胞凋亡数量比对照组增多（P<0.01）。7.乳腺癌组织样本中miR-6883-5p的表达增高,高于正常癌旁组织（P<0.05）;8.乳腺癌细胞中miRNA-6883-5p的表达水平高孕激素受体（PR）水平与mir-6883-5p表达水平呈正相关（P<0.05）。结论:1.miRNA-6883-5p是CDK4的调控因子。2.miRNA-6883-5p在乳腺癌细胞中的表达水平高于正常乳腺上皮细胞。3.miRNA-6883-5p能够促进乳腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力;能够影响乳腺癌细胞的周期分布,能够抑制乳腺癌细胞凋亡。4.乳腺癌组织样本中miR-6883-5p的表达增高,明显高于正常组织。
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