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现在，真菌毒素污染已经成为食品中最严重的污染之一，尤其是黄曲霉毒素污染。黄曲霉毒素包括很多种，它们都具有特别强的毒性，尤其是广泛存在于牛奶中的黄曲霉毒素M1（AFM1），因其与人们的生活息息相关，所以被人们广泛关注。AFM1是黄曲霉毒素B1（AFB1）在动物体内代谢产物，纯品是无色片状的长方形晶体，熔点为299℃，能在365nm的紫外光下发出蓝紫色的荧光。误食了含有AFM1的食物后，可能会导致肝脏器官发生功能性衰竭，形成肝癌或直接引起死亡。目前，对于AFM1的检测，人们常用的有三种检测方法，就是薄层色谱法、高效液相色谱法和液质联用法。这些方法都存在较多的缺点，例如对样品的前处理复杂、所用仪器昂贵、对操作人员要求高、灵敏度低、假性干扰结果等。而基于抗原抗体反应的免疫学检测方法具有灵敏性好、特异性强、操作简单和可以进行现场大规模检测等优点，所以，建立AFM1免疫学的快速检测方法就变得尤为迫切。本实验就旨在制备出AFM1的快速检测试剂盒。本实验研究的主要内容及结果如下：1. AFM1人工抗原的合成与鉴定采用肟化法改造AFM1，并使其分别偶联于载体蛋白BSA和OVA上，得到免疫原AFM1-BSA和包被原AFM1-OVA，然后采用薄层色谱法和紫外分光光度法及SDS-PAGE对肟化物和人工抗原进行鉴定，经过动物免疫即得到鼠源多抗血清，并采用ELISA方法对其进行鉴定。结果如下：肟化改造后，肟化物在薄层板上的迁移距离变短了；偶联物AFM1-BSA在274nm处出现最大吸收峰，且与BSA和AFM1的紫外吸收峰都不重合；AFM1-BSA的泳动速度明显小于BSA；免疫的3只小鼠效价均达到了在1×10-4左右，其中3号小鼠所产生的多抗血清的敏感性最好，半数抑制浓度IC50为133.8ng/mL。2.制备抗AFM1单克隆抗体并建立免疫学的定量检测方法本次试验是在AFM1鼠源多抗的基础上，运用细胞融合技术、杂交瘤技术等成功得到了AFM1mAb，并对其亲和力、敏感性和特异性等方面都进行了鉴定，得到了较好的结果。本次实验成功筛选出两株细胞，2C4E3和2C6F2，经过ELISA测定，上清效价分别为1:1.28×103和1:3.0×102，将其中较好的2C4E3细胞株进行扩大培养，得到的腹腔液的效价为1:5.12×105，经过计算，得出AFM1mAb的亲和常数Ka=2.71×1010L/moL，得到的抑制标准曲线y＝－0.4039x＋1.9463，相关系数为R2=0.9872，IC50=3.8ng/mL；且其与其它真菌毒素的交叉反应率均低于1%。3. AFM1免疫学快速检测试剂盒的研制通过各种ELISA检测试验，最终得到了抗原包被的最佳浓度是1：1000稀释，抗体工作的浓度能达到1:32000，建立了ELISA检测方法，并制备出了AFM1的检测试剂盒。该试剂盒的各项指标均较好，其中标准曲线的回归方程的相关系数R2是0.9872，添加回收实验结果均超过了80%，变异系数均小于15%，交叉反应率小于1%。经过对AFM1-Kit的各个指标的鉴定，最终可以得出AFM1-Kit符合检测指标，因此，AFM1-Kit可以用于乳品的检测。