玉米大斑病是世界玉米主产区的主要叶部病害。发病严重时常常造成巨大经济损失。在中国东北、西北、华北北部和南方山区的冷凉玉米种植区该病害发生较重。本文以快速碱化因子(RALF,Rapid alkalization factor)为研究对象,对玉米大斑病菌中StRALF基因保守序列进行了克隆,使用编码序列末端快速克隆技术(RACE)获得了cDNA序列全长,并对其编码蛋白进行了相关生物信息学分析,使用荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)技术对其进行了不同酸碱条件和不同侵染时期基因表达分析,结果如下:成功克隆玉米大斑病菌中StRALF基因保守序列,其长度为114 bp。通过对该基因保守序列编码蛋白进行生物信息学分析,可知此段序列编码37个氨基酸,推测分子量约为3.6 KD,理论等电点为7.74。经过氨基酸同源性比对分析,其与已公布的RALF蛋白具有一定同源性,但不完全保守。利用RACE技术获得StRALF基因的cDNA序列全长为279 bp,生物信息学分析后确定其编码92个氨基酸,推测为分泌蛋白。此蛋白不含有螺旋区域,所以不会执行代谢调节、识别分子、膜通道等功能。经过氨基酸同源性分析比对,所获得cDNA序列与克隆保守区相符,与其他快速碱化因子进行氨基酸同源性序列比对,它们具有一定的相似性。为后续StRALF蛋白的功能研究奠定了良好基础。玉米大斑病菌StRALF基因与病菌侵染有关。玉米大斑病菌在不同酸碱培养基中表型分析结果表明,弱碱性条件菌丝生长能力强;不同酸碱条件下,表现为弱碱性时产孢量高,致病力强。在由酸到碱的培养条件下,StRALF基因的表达量表现为先上调后下降,在弱碱性条件下比弱酸性时的表达量相对较高;在与寄主互作过程中,StRALF基因的表达量逐步上调,96 h时达到最大,为24 h时表达量的5倍,推测StRALF基因与病菌侵染有关;在不同酸碱条件下,用玉米大斑病菌接种叶片96 h后,pH为7.5时StRALF基因表达量达到最大,侵染率最高。在pH为3.5的条件下表达量最小,侵染率最低。说明弱碱性环境促进StRALF基因表达,利于侵染。