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目的:探讨非肥胖型多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)患者证候的生物学本质,利用脂质组学的方法确定不同证型非肥胖PCOS患者的生物标志物,结合其代谢路径分析其生物学机制,从宏观和微观两个方面揭示非肥胖型PCOS中医证的发生变化机制,为提升PCOS的辨证论治水平提供依据。
方法:1.PCOS临床调查表的研制及临床调查。基于文献的PCOS症状表词及证型特征研究,初步确定了PCOS临床调查表构架及条目池,经校验和预试形成表。开展了PCOS患者临床信息调查,获取了非肥胖型肝郁肾虚证、肝郁证和肾虚证的PCOS病例。
2.脂质组学检测及分析。收集非肥胖型PCOS患者血清41例,其中,肝郁型20例,肾虚型21例;肥胖型PCOS患者40例,其中,肝郁型和肾虚型分别20例;正常对照组20例。使用超高效液相色谱-质谱联用技术(UHPLC-QTOFMS)进行上机检测,所得数据先经峰识别、峰提取、峰对齐等预处理后进行数据分析。数据分析方法主要使用主成分分析(PCA),正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA),后进行单元变量和多元变量统计分析,最终筛选出生物标志物。通过对不同组别的生物标志物进行对比分析,并结合代谢通路探讨各证候形成的生物学机制,初步揭示非肥胖型PCOS患者的证本质。
结果:1.PCOS组与正常组(A1+A2+B1+B2与C)比较:甘油三酯(TAG)、Acar、胆固醇脂(CE)、LGTS、磷脂酰胆碱(PC)、PMeOH、神经酰胺类包括Cer-AS、Cer-AP、Cer-Ns等含量明显增多,差异有统计学意义(P<0.05);二脂酰甘油基三甲基高丝氨酸(DGTS)、溶血磷脂酰乙醇胺(LPE)、PEtOH、硫苷脂(SHexCer)、氧化磷脂酰胆碱(OxPC)、氧化磷脂酰乙醇胺(OxPE)等含量明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。
2.PCOS非肥胖组与肥胖组(A1+A2与B1+B2)相比:CE、溶血磷脂酰胆碱(LPC)、PMeOH、神经鞘磷脂(SM)等的含量明显增多,差异有统计学意义(P<0.05);ACar、骨形成蛋白(BMP)、Cer-NS、Cer-AS、Cer-AP、FA、甘油二酯(DAG)、DGTS等的含量明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。
3.PCOS肝郁组与肾虚组(A1+B1与A2+B2)相比:HexCer-AP、脂肪酸(FA)、TAG、PC、LPC、SM、PEtOH、OxPC等的含量明显增多,差异有统计学意义(P<0.05);ACar、葡萄糖醛酸甘油二酯(GLcADG)、氧化磷脂酰甘油(OxPG)、磷脂酰乙醇胺(PE)、DGTS、硫代异鼠李糖甘油二酯(SQDG)等的含量明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。
4.PCOS非肥胖型与肥胖型肝郁组(A1与B1)相比:CE、HBMP、磷脂酰乙醇胺(PG)、PC、LPC、SM、TAG等的含量明显增多,差异有统计学意义(P<0.05);ACar、BMP、Cer-NS、Cer-AS、Cer-AP、Cer-ADS、DAG、DGTS等的含量明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。
5.PCOS非肥胖型与肥胖型肾虚组(A2与B2)相比:PC、LPC、PG、PE、氧化磷脂酰肌醇(OxPI)等的含量明显增多,差异有统计学意义(P<0.05);ACar、BMP、Cer-AS、Cer-AP、Cer-ADS、DAG、DGTS、FA、TAG、PEtOH等含量明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。
6.PCOS肥胖型肝郁组与肾虚组(B1与B2)相比:Cer-NS,LPC等的含量明显增多,差异有统计学意义(P<0.05);Cer-AS、Cer-AP、DGTS、PC、磷脂酰肌醇(PI)、人骨基质内形成蛋白(HBMP)、SQDG、TAG、SM等含量明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。
7.PCOS非肥胖型肝郁组与肾虚组(A1与A2)相比:CE、LPC、Cer-AS、SM等含量明显增多,差异有统计学意义(P<0.05);DGTS、SQDG、GLcADG、HexCer、OxPI、OxPS、OxPG等含量明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。
结论:1.PC、SM与DAG、FA、Cers含量的反比变化,可能为PCOS患者肥胖与否的分子生物学基础。
2.OxPLs可能为非肥胖型PCOS肾虚证潜在的生物标志物,磷脂过氧化、自由基增多可能是PCOS肾虚证生物学基础。
3.LPC可能为非肥胖型PCOS肝郁证潜在的生物标志物,情志因素促发的炎症反应可能是PCOS肝郁证的生物学基础。
方法:1.PCOS临床调查表的研制及临床调查。基于文献的PCOS症状表词及证型特征研究,初步确定了PCOS临床调查表构架及条目池,经校验和预试形成表。开展了PCOS患者临床信息调查,获取了非肥胖型肝郁肾虚证、肝郁证和肾虚证的PCOS病例。
2.脂质组学检测及分析。收集非肥胖型PCOS患者血清41例,其中,肝郁型20例,肾虚型21例;肥胖型PCOS患者40例,其中,肝郁型和肾虚型分别20例;正常对照组20例。使用超高效液相色谱-质谱联用技术(UHPLC-QTOFMS)进行上机检测,所得数据先经峰识别、峰提取、峰对齐等预处理后进行数据分析。数据分析方法主要使用主成分分析(PCA),正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA),后进行单元变量和多元变量统计分析,最终筛选出生物标志物。通过对不同组别的生物标志物进行对比分析,并结合代谢通路探讨各证候形成的生物学机制,初步揭示非肥胖型PCOS患者的证本质。
结果:1.PCOS组与正常组(A1+A2+B1+B2与C)比较:甘油三酯(TAG)、Acar、胆固醇脂(CE)、LGTS、磷脂酰胆碱(PC)、PMeOH、神经酰胺类包括Cer-AS、Cer-AP、Cer-Ns等含量明显增多,差异有统计学意义(P<0.05);二脂酰甘油基三甲基高丝氨酸(DGTS)、溶血磷脂酰乙醇胺(LPE)、PEtOH、硫苷脂(SHexCer)、氧化磷脂酰胆碱(OxPC)、氧化磷脂酰乙醇胺(OxPE)等含量明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。
2.PCOS非肥胖组与肥胖组(A1+A2与B1+B2)相比:CE、溶血磷脂酰胆碱(LPC)、PMeOH、神经鞘磷脂(SM)等的含量明显增多,差异有统计学意义(P<0.05);ACar、骨形成蛋白(BMP)、Cer-NS、Cer-AS、Cer-AP、FA、甘油二酯(DAG)、DGTS等的含量明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。
3.PCOS肝郁组与肾虚组(A1+B1与A2+B2)相比:HexCer-AP、脂肪酸(FA)、TAG、PC、LPC、SM、PEtOH、OxPC等的含量明显增多,差异有统计学意义(P<0.05);ACar、葡萄糖醛酸甘油二酯(GLcADG)、氧化磷脂酰甘油(OxPG)、磷脂酰乙醇胺(PE)、DGTS、硫代异鼠李糖甘油二酯(SQDG)等的含量明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。
4.PCOS非肥胖型与肥胖型肝郁组(A1与B1)相比:CE、HBMP、磷脂酰乙醇胺(PG)、PC、LPC、SM、TAG等的含量明显增多,差异有统计学意义(P<0.05);ACar、BMP、Cer-NS、Cer-AS、Cer-AP、Cer-ADS、DAG、DGTS等的含量明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。
5.PCOS非肥胖型与肥胖型肾虚组(A2与B2)相比:PC、LPC、PG、PE、氧化磷脂酰肌醇(OxPI)等的含量明显增多,差异有统计学意义(P<0.05);ACar、BMP、Cer-AS、Cer-AP、Cer-ADS、DAG、DGTS、FA、TAG、PEtOH等含量明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。
6.PCOS肥胖型肝郁组与肾虚组(B1与B2)相比:Cer-NS,LPC等的含量明显增多,差异有统计学意义(P<0.05);Cer-AS、Cer-AP、DGTS、PC、磷脂酰肌醇(PI)、人骨基质内形成蛋白(HBMP)、SQDG、TAG、SM等含量明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。
7.PCOS非肥胖型肝郁组与肾虚组(A1与A2)相比:CE、LPC、Cer-AS、SM等含量明显增多,差异有统计学意义(P<0.05);DGTS、SQDG、GLcADG、HexCer、OxPI、OxPS、OxPG等含量明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。
结论:1.PC、SM与DAG、FA、Cers含量的反比变化,可能为PCOS患者肥胖与否的分子生物学基础。
2.OxPLs可能为非肥胖型PCOS肾虚证潜在的生物标志物,磷脂过氧化、自由基增多可能是PCOS肾虚证生物学基础。
3.LPC可能为非肥胖型PCOS肝郁证潜在的生物标志物,情志因素促发的炎症反应可能是PCOS肝郁证的生物学基础。