靶基因噬菌体随机展示肽库是用DNase Ⅰ降解特定基因所产生的随机DNA片段替代合成库中随机合成的DNA片段，是噬菌体展示技术的最新应用。此类肽库展示的外源肽具有序列来源的限制性，同时又具有片段大小和来源区域的随机性，便于复杂抗原表位和构象表位的分析和展示，在研究新型病毒蛋白抗原方面有很大优越性。 本研究利用该项技术进行了两部分工作：一、庚型肝炎病毒（HGV）全基因组cDNA噬菌体随机展示肽库的构建及筛选；二、噬菌体展示人干扰素αA-2b（hIFNαA-2b）和hIFNαA-2b噬菌体随机展示肽库的构建。 一、HGV全基因组cDNA噬菌体随机展示肽库的构建及鉴定 庚型肝炎病毒（HGV）是1995年鉴定出的单正链线性RNA病毒，基因组全长约9.4kb，属黄病毒科成员。研究表明，HGV呈全球性分布，主要经血液传播，存在高危人群和持续性感染，还可与其他型肝炎病毒混合感染。我国人群的血清HGV抗体携带率高达3.5％，献血员HGV RNA检出率约为1％～3％。鉴于HGV RNA在人群中有相当高的阳性率，对这类新型微生物的传播、致病、变异及检测等的研究就显得十分必要和迫切。目前已鉴定的HGV抗原表位很少，阻碍了对HGV致病与免疫机制的研究，也影响了HGV感染的诊断与防治工作。为研究与HGV致病或保护性相关表位，并为HGV感染的诊断与防治提供依据，本研究采用DNaseⅠ部分消化法制备HGV全基因组cDNA随机片段，在随机片段两端加上Linker，并克隆至噬菌粒载体pCANTAB5X中，转化大肠杆菌TG1，辅助噬菌体拯救，PEG沉淀，即获得HGV全基因组cDNA噬菌体随机展示肽库。所建肽库的容量为5.34×10⁴个菌落形成单位，滴度为1.41×10¹⁴TU/ml。原位杂交结果证明在HGV基因组的不同区域均有阳性菌落，酶切鉴定和DNA测序结果显示插入片段的长度和片段来源区域均具有随机性，即所建肽库具有良好的完整性和随机性。进一步用HGV E2单抗对该库进行3轮亲和筛选，对结合试验和抑制试验均呈阳性克隆进行测序分析。结果发现核心序列中有一段“SRGSPRI”与HGV E2的第443-449aa的等电点相近，推测这段“SRGSPRI”序列可能与HGV E2抗原表位的空间构象相似。 倾I：论义：庆型肝炎病毒和人干扰素 Q A·Zb 比剂收啦菌体随机展示肽库的构建及鉴定 中义摘要 二、噬菌体展示人干扰素 a AZh（kIFN a A－Zb）和 bIFN a A－Zb噬菌体随 机展示肽库的构建 人干扰素 a（hIFN a）家族至少由 15种亚型组成，各亚型之间氨基酸序列上 有78％q8％的同源性。所有亚型都具有调节兔疫反应、细胞增殖和抑制病毒感染 的功能。但这些功能是通过不同细胞间和不同分子途径进行的，且己广泛应用于 肿瘤和肝炎的临床治疗。又有报道认为 IFN a在临床应用中存在内分泌和神经系 统的副作用，因此研究 IFN Q各亚型的结构与功能就显得十分必要和重要。 IFN a的抗病毒活性需要空间结构的维持，噬菌体展示技术应用于干扰素结 构与功能研究的关键在于噬菌体表面展示的融合蛋白干扰素是否具有生物活性。 本实验构建了 hIFN a A《 噬菌体，经生物学活性检测 3xlo‘TU的 hI刚 a A毛 噬 菌体和 slU的基因工程 IFN a－Za抗病毒活性相当。该实验结果与理论值基本一 致，说明 hIFN a A－Zb可被该系统有效展示，并能保持其相应的抗病毒生物活性， 即成功建立了噬菌体展示外源肽（hIFN a）的技术平台。在此基础上又利用该系 统建立了 hIFN。A－Zb噬菌体随机展示文库，为进一步用 hIFN a单抗或细胞从该 肽库中筛选 hIFN a单抗的抗原表位或高活性类干扰素分子奠定基础。