血浆中microRNA水平与急性心肌梗死相关性的研究

来源 :大连医科大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:sdsdfe45
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目的评估血浆中miR-92a和miR-126水平的变化在急性心肌梗死中的应用价值。对血浆中microRNA(miRNA)的标准化检测进行初步研究,为临床实践提供可靠的参考依据。方法1.选取2017年10月至2018年4月于北部战区总医院就诊的AMI(Acute myocardial infarction,急性心肌梗死)患者40例为心梗组,健康体检者41例为对照组,通过qPCR(Realtime Fluorescence quantitative PCR,实时荧光定量聚合酶链式反应)监测AMI患者和健康体检者血浆中miR-92a和miR-126的相对表达量。采用二元logistic回归根据年龄、miR-126和miR-92a的数值建立风险评分,构建急性心肌梗死风险评估模型,并对每位患者的AMI风险进行了评估。采用ROC曲线(Receiver operating characteristic curve,受试者工作特征曲线)和bootstrap resamping评价模型对AMI风险的预测效能,判断其对AMI的诊断和预测价值。2.选取2017年9月于北部战区总医院就诊的AMI患者8例,健康体检者23例为miRNA标准化的研究对象,分析实验分析前的饮食状态、抗凝剂的选择、血浆储存条件及溶血情况,对血浆miRNA的定量和AMI风险评分的影响。分析实验过程中,提取、反转录和qPCR对血浆miRNA定量的影响,并用16例临床标本对实验结果进行验证。结果1.心梗组患者血浆中miR-92a和miR-126水平较对照组显著降低,差异有统计学意义(p<0.05)。风险评分公式为RS=∑iwixi+2.573。AMI风险评估模型中,年龄为AMI的危险因素(OR=1.068,95%CI 1.018-1.158),miR-92a和miR-126为AMI的保护性因素(OR92a=0.363,95%CI 0.171-0.770;OR126=0.446,95%CI 0.245-0.811),即年龄越大,血浆中miR-92a和miR-126水平越低,风险评分越高,发生AMI的风险越高。AMI风险评估模型的AUC(Area under curve,曲线下面积)为0.938(95%CI,0.862-0.980),灵敏度为0.95(95%CI,0.831-0.994);特异度为0.893(95%CI,0.679-0.928)。Bootstrap resamping检验,P<0.05。2.miRNA检测标准化的研究中,分析前的影响因素主要来源于饮食状态、抗凝剂的选择和储存条件,溶血与miRNA水平呈正相关,但经内参校准后风险评分无明显变化。进食后风险评分立即升高,在2 h达到峰值后开始下降。使用肝素锂抗凝剂时,miRNA定量(>35ct)与风险评分均下降,而EDTA-K2与枸橼酸钠抗凝对miRNA检测结果影响较小。血浆于4℃储存1周后,miRNA定量与风险评分均较-80℃储存时降低。在实验分析过程中,提取血浆miRNA时离心柱法优于Trizol LS,并且血浆量为200ul和300ul时回收率最高。miRNA的检测差异主要来源于提取步骤,且主要为有机萃取步骤,而反转录与PCR对miRNA定量影响较小,选取的8例健康体检者和8例AMI患者进一步验证了上述结果,并且发现差异经内参校准后减小,但经外参校准后却增加。37份血浆的风险评分呈正态分布,平均值为-3.75,标准差为3.138。结论心梗患者血浆miR-92a和miR-126表达降低,可能与心肌损伤和动脉粥样硬化有关,AMI风险评估模型可以较准确的预测AMI,miR-92a和miR-126可以为AMI的临床诊断和预测提供参考依据。检测miRNA时,严格遵循采样,检测和分析的标准操作程序,可以发现和减少检测流程中的非特异性波动。miRNA检测标准化的初步研究可以为临床血液检测miRNA提供参考。
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