10升牛初乳中IGF-Ⅰ的生产及在大鼠肠粘膜损伤修复中的作用

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牛初乳是指母牛产后2 d~3 d内所分泌的乳汁。初乳中不仅含有丰富的营养物质,而且还含有大量的生物活性物质。研究表明,IGF-Ⅰ在牛初乳中大量存在,是牛初乳中最重要的促生长因子。本课题以牛初乳为原料制备IGF-Ⅰ,研究了离心脱脂、凝乳酶凝乳、酸醇去结合蛋白、超滤除杂蛋白的工艺条件,确定的最适条件为:在36℃,4000 r/min的条件下离心15 min制备脱脂乳;脱脂乳温度36℃,pH 6.5,木瓜凝乳酶∶料液(V∶V)为1∶50,凝乳时间40 min;制备的乳清在4℃下与酸醇溶液以体积比1∶4混合均匀,静置30 min后离心去除IGF-Ⅰ结合蛋白。然后经60 KD~80KD中空纤维膜超滤去除大分子杂蛋白,再采用10 KD~20 KD去除小分子杂蛋白,确定的超滤工艺条件为料液温度36℃,pH 5.5,操作压力0.06 MP;最后采用6 KD中空纤维膜超滤去除乳糖等小分子物质,确定的最适条件为料液温度36℃,pH 8.0,操作压力0.06 MP。按照已经建立的技术路线进行大规模的IGF-Ⅰ的制备,10升初乳经过上述工艺处理后共获得粉状产品63.02 g,IGF-Ⅰ相对含量为2106.3 ng/mg,IGF-Ⅰ的回收率为48.79%。采用氢氧化钠作为化学清洗剂,探索了清洗剂温度、流量、时间等因素对膜清洗效果的影响,确定了氢氧化钠的最佳清洗条件参数为:温度35℃,流量为40 L/h,时间为25 min。建立了炎症性肠炎(IBD)大鼠模型,以外源IGF-Ⅰ干预IBD大鼠,通过对结肠组织中髓过氧化物酶和超氧化物歧化酶活性的检测、肠道组织病理形态学观察,推测出外源性IGF-Ⅰ对肠粘膜损伤有一定的修复作用。
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