毛细管电泳免疫分析法检测诺氟沙星兽药残留

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农兽药残留是影响食品安全的主要因素之一,建立快速有效的检测分析方法对食品品质监管具有十分重要的意义。诺氟沙星是一类人畜共用的合成抗生素,属于第三代氟喹诺酮类药物,临床上广泛用于治疗消化系统紊乱和泌尿生殖感染等症状。如果长期食用诺氟沙星残留过量的食品,通过食物链的蓄积作用,不仅会紊乱人体内分泌系统,甚至还会造成体内细菌耐药性增强,影响药物的治疗效果。毛细管电泳免疫分析技术是近年发展起来的一种新型分析技术,它将电泳法的高分离效率和免疫法的高灵敏度结合起来。由于具有高通量、样品处理简单、耗样量少等突出优点,此法广泛应用于医药、食品和化工等分析应用领域。本研究将毛细管电泳免疫法应用于诺氟沙星检测,建立了诺氟沙星毛细管电泳免疫分析联用激光诱导荧光检测器的检测方法。本方法基于荧光标记诺氟沙星和诺氟沙星标准品竞争结合少量氟喹诺酮类多克隆抗体,通过检测器检测,产生游离的诺氟沙星和抗原抗体免疫复合物两个峰,峰面积会随着诺氟沙星标准品的浓度变化而相应改变,因而能对诺氟沙星定性定量分析。实验中合成出荧光标记物,同时优化了影响毛细管电泳分离效果的各项因素,如免疫反应孵育时间、电泳缓冲液的浓度与pH值、电泳分离电压与进样量等。结果表明,在25kV电压下,抗原抗体孵育5min后0.5psi压力下进样5s,电泳缓冲液组成为pH8.030mM Na2B4O7-10mM NaH2PO4,5min内即可完成分离,各峰峰形好,分离度较高。新建立的分析方法在0.08~50ng/mL范围内线性良好,最低检出限为0005ng/mL。将1ng/mL的诺氟沙星标准品进行毛细管电泳免疫分析,一天之内重复进样9次,连续5天,测得免疫复合物的迁移时间日内精密度为0.17%,日间精密度为0.23%。将所建立的分析方法应用于鸡肉、猪肉、鱼肉和牛奶的检测,经提取分析后测得回收率在69.7%-92.4%之间,相对标准偏差小于6.5%,诺氟沙星在实际样品中的最低检出限为0.25μg/kg,表明新建立的方法能对食品中残留的诺氟沙星准确定性定量。
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