【摘 要】
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该研究将具有顺式剪接功能的蛋白内含子插入目的基因后转化高等模式植物烟草,研究蛋白内含子在高等真核细胞是否能够表达并具有剪接活性,对应用反式蛋白剪接技术防止植物转基
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该研究将具有顺式剪接功能的蛋白内含子插入目的基因后转化高等模式植物烟草,研究蛋白内含子在高等真核细胞是否能够表达并具有剪接活性,对应用反式蛋白剪接技术防止植物转基因扩散具有重要意义.突变的aroA编码的EPSPS合成酶(即第101位脯氨酸突变为丝氨酸)对草甘膦具有抗性.将断裂型Ssp DnaB和Rma DnaB分别插入aroA,获得了pLEBT和pLERT;具有顺式剪接功能的Ssp DnaB和Rma DnaB分别与aroA融合后构建成pLEBC和pLERC;BglⅡ/XhoⅠ分别酶切pLEBC,pLEBT,pLERC和pLERT,所获得的基因片段插入表达载体pET-32后得到表达载体pETLEBC,pETLEBT,pETLERC和pETLERT.IPTG诱导后经SDS-PAGE分析检测到构建的表达载体能在DE<,3>中有效表达，并发生相应的蛋白剪接.进一步用BglⅡ/XhoⅠ酶切pLEBC和pLERC，获得的基因片段插入pLYM的BamH I/Sal I位点构建成植物表达载体，农杆菌叶盘法转化烟草.经基因组PCR分析检测到构建的这段融合基因片段整合入植物核基因组;进一步的RT-PCR分析显示其可在高等植物细胞中成功表达，为进一步将具有反式剪接功能的断裂型蛋白内含子转化入核基因组和叶绿体基因组并筛选高效表达的抗除草剂转基因植株奠定了实验基础.
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