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研究表明,银杏叶提取物(EGb)的主要成分为银杏黄酮和萜类内脂,对神经系统、血管平滑肌运动和其它内脏机能具有广泛的调节作用。本研究应用细胞内生物电记录技术及单个结肠平滑肌细胞(酶解法)分离与显微镜测微技术,观察EGb761对豚鼠离体肠系膜下神经节(IMG)细胞生物电及对远端结肠离体单个平滑肌细胞舒缩运动的影响,从电生理学和药理学角度对EGb761是否影响IMG及其支配的远端结肠平滑肌运动以及作用机制作一初步探讨。实验结果如下: 1 EBb761对IMG细胞生物电的影响及其机制的初步探讨 1.1 豚鼠IMG细胞的静息电位平均为-52.6±0.5mV(n=110);膜电阻平均为55.2±3.8MΩ(n=80)。 1.2 用EGb761(35 mg~350 mg/L)灌流IMG细胞(n=80),22.5%(18/80)的细胞不产生明显反应,77.5%(62/80)的细胞对EGb761敏感。在敏感的IMG细胞中,71.0%(44/62)的细胞为去极化反应,去极化表现为缓慢、持久,电位幅度平均为5.4±0.7 mV,时程为231.8±46.1 S,19.4%(12/62)的细胞为超极化反应,9.7%(6/62)的细胞出现双相反应。在EGb761引起的去极化反应中,膜电阻可以减小(33.8%)、不变(40.0%)或增大(27.2%),提示EGb761对IMG细胞作用所表现的复杂性。 1.3 由EGb761引起的去极化,在一定范围内,随灌流浓度的增加(35 mg~350 mg/L),其去极化幅度随之增大,表现出一定的量效关系(n=10)。 1.4 用胆碱受体阻断剂阿托品(10-4mol/L)和六烃季胺(10-4mol/L)、肾上腺安徽医科大学硕士学位论文素受体阻断剂酚妥拉明(10一4mol/L)和心得安(10一4mol/L)灌流神经节,无论是单独还是联合运用,对EGb761去极化反应均无影响(n二7)。提示这种去极化反应是通过非胆碱非肾上腺素受体途径实现的。 1.5低钙(0.25,o1/L)/高镁(12.0 Inmol/L)克氏液可以部分地阻抑EGb761引起的去极化反应(n=8),使去极化幅度降低。提示EGb761既可直接影响突触后神经元也可影响某种中间递质释放而发挥作用。 1.6 EGb761与其他递质的相互作用:EGb761还可抑制由5一HT和BOM所引起的工MG细胞(n=5)的去极化反应,使其幅度减小或消失。提示EGb761对交感神经节细胞的作用与效应细胞当时所处的机能状态有关,这与自主神经在调控内脏活动过程中究竟产生何种效应与其所支配的效应器所处的机能状态有关这一特性相一致。2 EGb761对远端结肠平滑肌细胞舒缩活动的影响 2.1远端结肠平滑肌细胞形态呈梭形,长短不一,有一个中心核,在HEPEs-Ringer缓冲液中,部分平滑肌完全舒张,部分处于不同程度的收缩状态,平均长度为104士34林m。 2.2经台盼蓝染色后,活细胞拒染,而死细胞则呈蓝色。经细胞存活率测定,通过细胞计数发现,缓冲液中细胞存活率大于90%。 2.3 EGb761对结肠平滑肌细胞具有舒张作用,在加入o.n一3.59/L浓度EGb761的缓冲液中,EGb761对结肠平滑肌细胞的作用呈剂量一效应关系,最大反应浓度为1.759/L,其舒张效应为12.79%(P(0.05)。 2.4乙酞胆碱(ACh)(10一6mol/L)可明显增强结肠平滑肌细胞的收缩。用EGb761预先孵育lmin,可抑制ACh效应的44.13%(P(0.01)。 2.5腺昔酸环化酶激动剂Forskolin可增强EGb761的舒张效应,与单独应用EGb761组相比较其舒张百分数增加8.87%(P<0.05)。