【摘 要】
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目的:本实验的目的是观察益肾通络方对雄性苯并（a）芘（BaP）染毒大鼠精子DNA损伤的影响,从Ba P染毒致精子DNA损伤的大鼠中筛选出有差异的miRNA、XRCC1蛋白表达,探讨生精细胞DNA损伤的中医药防护机制,为中医药防护因环境污染物所致遗传物质的损伤提供理论支持。方法:采用SAS软件产生随机数字法随机分为3组:空白对照组10只,BaP染毒组、益肾通络方组,每组各2 0只。用配置好的工作液对
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目的:本实验的目的是观察益肾通络方对雄性苯并（a）芘（BaP）染毒大鼠精子DNA损伤的影响,从Ba P染毒致精子DNA损伤的大鼠中筛选出有差异的miRNA、XRCC1蛋白表达,探讨生精细胞DNA损伤的中医药防护机制,为中医药防护因环境污染物所致遗传物质的损伤提供理论支持。方法:采用SAS软件产生随机数字法随机分为3组:空白对照组10只,BaP染毒组、益肾通络方组,每组各2 0只。用配置好的工作液对BaP染毒组和益肾通络方组大鼠进行腹腔注射染毒,应用DMSO对空白对照组大鼠进行腹腔注射,每日1次,共进行60天。从腹腔注射染毒第3 1天开始对BaP染毒组进行益肾通络方灌胃,空白对照组和BaP染毒组同时灌胃生理盐水,直至实验结束,最后进行取材并检测各组大鼠DFI、病理组织形态情况。1.干预结束后,取材空白对照组、BaP染毒组、益肾通络方组大鼠睾丸组织,通过Western blot检测各组大鼠睾丸组织中XRCC1蛋白表达结果并进行对比。2.提取空白对照组、BaP染毒组、益肾通络方组大鼠睾丸组织标本的总RNA,用芯片杂交技术对睾丸组织进行高通量测序获得miRNA差异表达谱系。对各对比组行miRNA差异基因筛选,检测差异miRNA表达情况并对差异miRNA进行基因本体论（Gene Ontology,GO）分析,最后挑选有显著差异表达的miR-466c,应用半定量逆转录酶聚合酶链反应法验证miR-466c表达含量。结果:1.与空白对照组比较,BaP染毒组D F I指数显著升高（P<0.0 5）,益肾通络方组DFI低于Ba P染毒组（P<0.05）;空白对照组睾丸病理切片示生精小管完整,排列整齐密集。生精上皮数量适中,层次分明,管腔内能够见到成熟精子,间细胞形态无异常。Ba P染毒组大鼠睾丸组织生精小管缩小,生精上皮层数少,生精细胞排列疏松,生殖细胞及间质细胞部分变性。益肾通络方组大鼠睾丸组织相较于Ba P染毒组损伤轻,生精小管边界尚清晰,同时生精上皮厚度恢复,生精细胞数量较多,部分管腔内能够见到成熟精子,间质细胞没有变性。2.与空白对照组比较,BaP染毒组大鼠睾丸X R C C 1蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.05=;与益肾通络方组比较,Ba P染毒组大鼠睾丸XRCC1蛋白表达降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。3.P C A、热图分析显示空白对照组、BaP染毒组、益肾通络方组m i R N A表达水平存在显著差异。空白对照组与益肾通络方组相比较,差异表达m i R N A中有4 3个上调,2 2个下调;空白对照组与BaP染毒组比较,差异表达miRNA中有13个上调,16个下调。益肾通络方组与Ba P染毒组比较,差异表达miRNA中有39个上调,20个下调。GO分析显示这些差异主要集中在细胞过程、细胞成分、细胞黏附、催化活性方面。在这些差异基因中,我们发现miR-466c差异倍数改变显著,在Ba P染毒组表达显著下调,益肾通络方干预后,miR-466c水平差异倍数改变显著,上调较明显。结论:B a p染毒致大鼠精子D N A损伤后,益肾通络方干预能改善睾丸组织的损伤程度,可通过上调miR-466c、XRCC1蛋白表达促进大鼠生殖细胞的修复,逆转Bap染毒致大鼠精子DNA损伤过程,提高精子DNA完整性。
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