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血栓性疾病严重危害人类的健康和生命,对个人、家庭和社会都造成了巨大的物质和精神损失。但目前临床治疗血栓性疾病最常用的溶栓剂却不尽如人意:或特异性差有严重副作用;或作用时间短、溶栓能力弱,需长时间、大剂量使用;或者生产不易,物稀价昂。纳豆(natto)在日本是一种历史悠久的传统食品,系由蒸煮后的大豆接种纳豆芽孢杆菌发酵制得。纳豆芽孢杆菌在发酵过程中产生的纳豆激酶(Nattokinase,NK)是一种具有强烈纤溶活性的碱性丝氨酸蛋白酶。与传统溶栓剂相比纳豆激酶具有纤溶作用强,药效时间长,可通过静脉与口服两种途径给药以及不引起出血的副作用等优点,使其具有开发成新一代溶栓药以及新型保健产品的潜力。本研究从五株出发菌株中分离筛选出纳豆芽孢杆菌并进行发酵培养,通过发酵产物的纤溶活性测定纳豆激酶的酶活,筛选出一株产酶活力较高,酶活稳定的菌株N391。主要结论如下:1对能产生纳豆激酶的菌群进行了筛选,经纤维蛋白平板复筛多次,分离得到了24株高纤溶活性有效菌株,经鉴定均为革兰氏阳性细菌,其纳豆激酶相当于尿激酶的酶活均大于1000 U/mL2经过遗传稳定性实验以及纳豆固体发酵感官评价最终得到菌株N391,其纳豆激酶相当于1722.4 U/mL尿激酶酶活。3对分离得到的菌株N391进行常规的形态、生理生化特征以及与枯草芽孢杆菌的比较,初步判断该菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)4利用细菌16S rDNA通用引物对其16S rRNA进行PCR扩增,得到1511bp的片段,该PCR产物序列通过Blast软件在NCBI网站中进行同源性比较,通过DNA MAN和MAGE3.1软件绘制系统发育树,结果表明:菌株N391的16S rRNA序列(DQ906100)与枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)的16S rRNA序列的同源性在99%以上,在系统发育树中,菌株N391与Bacillus subtilis在同一分支,且遗传距离最短。结合常规的形态、生理生化鉴定,N391的形态及大部分生理生化特征与Bacillus subtilis极为相似,表明菌株N391属于Bacillus subtilis的一个菌株,由此初步确定该菌在微生物系统发育学上的地位。