【摘 要】
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原始生殖细胞（PGCs）是用做分离和克隆胚胎干细胞（ES）的一种新的细胞资源。本研究将30-45日龄的蒙古绵羊胚胎生殖嵴及其邻近组织用机械剪碎和胰蛋白酶+EDTA消化处理，未加任何细胞生
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原始生殖细胞（PGCs）是用做分离和克隆胚胎干细胞（ES）的一种新的细胞资源。本研究将30-45日龄的蒙古绵羊胚胎生殖嵴及其邻近组织用机械剪碎和胰蛋白酶+EDTA消化处理，未加任何细胞生长因子仅添加DMEM（低糖）+10％FBS犊牛血清，在38.0℃、5％CO2浓度、饱和湿度条件下，将原始生殖细胞与其胎儿成纤维细胞共培养，其结果：在原代培养的第6天时观察到了由PGCs分裂增殖而成的鸟巢状绵羊类ES细胞集落。对第6代类ES细胞进行碱性磷酸酶染色鉴定，则所有类ES细胞集落均为AKP阳性，染成深棕色。核型分析结果染色体正常等。这些表明培养得到的细胞确为类ES细胞。H·E染色后可观察到类ES细胞集落呈马蹄状，细胞聚集为几个生长分裂中心。类ES细胞核大，细胞质少，细胞之间界限不清。在透射电镜下细胞核仁明显、核异染色质少；细胞质中核糖体较多，内质网、线粒体发达，部分细胞的细胞核膜上出现小泡，染色质边集，染色质形成凋亡小体。经过冷冻并在液氮里存放一个月后解冻培养，则类ES细胞可以存活并生长发育为集落，并传2代电镜观察结果60％以上细胞呈现凋亡。
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