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背景:急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)是儿童最常见的恶性肿瘤,传统的化疗方法缺乏特异性,化疗相关死亡率较高。胰岛素样生长因子Ⅰ受体(insulin-like growth factor-Ⅰ receptor,IGF-IR)在多种肿瘤细胞中均呈过度表达,参与肿瘤的发生发展。据此推测IGF-IR在儿童ALL细胞株Jurkat细胞中也呈过度表达,通过应用靶向IGF-IR的单克隆抗体(monoclonal antibodies,MAb)可以抑制Jurkat细胞的生长。本课题就此进行了相关的研究。
目的:探讨IGF-IR在Jurkat细胞株的表达和定位及IGF-IR MAb对Jurkat细胞株增殖及凋亡的影响。
方法
Jurkat细胞株培养于含有10%胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)的RPMI1640培养基中。
1.应用免疫细胞化学方法检测Jurkat细胞株IGF-IR的表达和定位。
2.用浓度为0.001μg/ml、0.01μg/ml、0.1μg/ml、1μg/ml、10μg/ml的IGF-IR MAb分别作用于Jurkat细胞48小时,应用CCK-8法测定细胞的增殖。
3.根据CCK-8的结果,选用10μg/ml的IGF-IR MAb作用于Jurkat细胞48小时,应用流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测细胞的凋亡情况。
结果
1.IGF-IR在Jurkat细胞株普遍表达,阳性表达率100%,以细胞膜及细胞浆混合型表达为主。
2.浓度为0.001μg/ml、0.01μg/ml、0.1μg/ml、1μg/ml、10μg/ml的IGF-IR MAb作用Jurkat细胞48小时,细胞的增殖受到抑制,抑制率分别为:(9.67±1.17)%、(14.89±1.06)%、(17.64±0.81)%、(20.15±1.14)%、(24.10±1.11)%,随着IGF-IRMAb浓度的增大,细胞的增殖抑制率逐渐增加,不同浓度组组间两两比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。
3.浓度为10μg/ml的IGF-IR MAb作用Jurkat细胞48小时,细胞的早期凋亡率为(13.73±1.16)%,晚期凋亡率为(20.44±2.47)%,总凋亡率为(34.18±3.41)%;对照组细胞的早期凋亡率为(6.27±0.67)%,晚期凋亡率为(10.18±0.81)%,总凋亡率为(16.45±1.38)%。IGF-IR MAb组细胞的早期凋亡率、晚期凋亡率及总凋亡率均较对照组增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。
结论
1.IGF-IR在Jurkat细胞株呈普遍表达,以细胞膜及细胞浆混合型表达为主。
2.IGF-IR MAb可以抑制Jurkat细胞的增殖,IGF-IR MAb对Jurkat细胞的增殖抑制作用呈剂量依赖性。
3.IGF-IR MAb可以促进Jurkat细胞的凋亡。