随着抗生素在养殖业,临床中的大量使用,许多抗生素经过动物和人体循环后,排放到水环境中,水环境中的微生物因长期暴露于含有低浓度的抗生素的水环境中,逐渐进化出抗生素的耐药性。细菌的耐药性是人类所面临的一个无法避免的重大科学难题。抗菌肽（AMPs）是一类在自然界中广泛分布的小分子多肽。是一种极具潜力的新型抗细菌抗病毒药物。随着克氏原螯虾养殖规模的加大,养殖密度的提高,由细菌病毒及真菌所造成的疾病也逐渐增加。研究抗菌肽在体内的功能将有利于人们解决细菌耐药性这一科学难题,同时为水产病害防控产品的开发提供有价值的参考。1.抗脂多糖因子5能够与大肠杆菌的30S核糖体蛋白S4和Mscl相互作用抑制细菌的增殖抗菌肽（AMPs）一般都是小蛋白,在先天免疫抵御病原入侵的过程中十分重要。抗脂多糖因子（Anti-lipopolysaccharide factor,ALF）具有保守的脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）结合结构域,能够与LPS结合并中和LPS的活性。ALF的抗菌机制需要被进一步的研究。PcALF5在体外能够抑制细菌的生长.并在体内促进克氏原螯虾的细菌清除能力。Far-western blot的结果表明PcALF5能够与两个大肠杆菌的蛋白相互作用（约为25 kDa和15 kDa）。质谱分析、Far-western blot实验和Pulldown实验结果表明30S核糖体蛋白S4（25 kDa）能够与PcALF5相互作用。进一步的分析表明另一个与PcALF5结合的大肠杆菌蛋白可能是离子膜通道蛋白MscL,MscL被报道能够参与多种蛋白质和抗生素的跨膜运输。实验结果表明PcALF5能够抑制大肠杆菌蛋白质的合成,同时能够诱使核糖体组件的转录水平升高。本课题预示着PcALF5能够通过与MscL相互作用转运到大肠杆菌胞内,靶向30S核糖体蛋白S4,进而抑制蛋白质的合成。本研究揭示了PcALF5参与抗菌免疫应答的可能机制,为抗菌多肽类药物的研究提供了新的参考。2.两个高度同源的溶菌酶的鉴定与功能分析溶菌酶在真核生物和原核生物中均有分布,在先天免疫抵御病原入侵的过程中发挥着重要的功能。溶菌酶参与抵御病原感染的活性区域,还有待进一步解析。本研究从克氏原螯虾中鉴定得到了两种高度同源的溶菌酶。使用SWISS-MODEL软件以溶菌酶（PDB ID 4PJ2.2.B）作为模板预测了PcLysi4和PcLysi5的结构。结果表明PcLysi4和PcLysi5的结构高度相似,但是PcLysi5相较于PcLysi4在127-139氨基酸位点具有更多的aa组成α螺旋结构,在49-57氨基酸位点具有更长β叠片结构。PcLysi4和PcLysi5在体内能够提高克氏原螯虾的细菌清除能力,提高弧菌感染后克氏原螯虾的存活率,在体外能够抑制多种革兰氏阳性菌与革兰氏阴性菌的增殖。研究结果表明PcLysi5能够抑制WSSV的复制,并能提高WSSV感染后克氏原螯虾的存活率;而PcLysi4未表现出明显的抗病毒活性。进一步分析发现PcLysi5能够与WSSV的囊膜蛋白VP24相互作用。本研究阐释了溶菌酶参与抗病毒免疫反应的活性区域,将为抗病毒蛋白药物的开发提供一定的参考。