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奶牛妊娠期特异表达蛋白可作为妊娠标记蛋白。本研究旨在探究妊娠相关血浆蛋白A(PAPPA)、妊娠特异蛋白8(PLAC8)和妊娠相关糖蛋白(PAG)三种妊娠标记蛋白在奶牛妊娠期外周血血浆中的表达规律，以筛选妊娠早期优势奶牛胎盘活性物质，为奶牛早期妊娠诊断提供依据。本研究采集奶牛空怀期、妊娠30d、60d、90d、150d和240d血浆，采用柱式病毒RNAout试剂盒提取血浆中游离的胎儿RNA，通过RT-PCR分析三种妊娠标记蛋白的mRNA的表达水平。
本研究主要分为两个部分：
一、奶牛外周血中游离胎儿RNA的提取
由于血浆中胎儿游离RNA含量极少且存在形式特殊，提取出高质量的RNA存在着一定的困难，因此本试验中提取胎儿游离RNA是研究的一个重要环节。试验对比了常规RNA提取和柱式病毒RNAout试剂盒提取两种方法，结果显示：用普通的RNA提取方法不能获得血浆中游离的RNA，而采用柱式病毒RNAout试剂盒可以从血浆中提取出高质量的RNA。
二、奶牛妊娠期外周血中PAPPA，PLAC8和PAG的mRNA表达规律
在妊娠奶牛，PAPPA，PLAC8和PAG都可以作为一种妊娠标记蛋白。据目前的研究报道，PLAC8和PAG仅由胎盘组织分泌表达，具有妊娠特异性；PAPPA在其他组织也有微量表达，但表达水平远低于胎盘。本研究显示：(1)与空怀组相比，妊娠期血浆中的PAPPA的mRNA水平显著提高(P＜0.05)，而妊娠150d组与空怀组相比则差异极显著(P＜0.01);(2)PLAC8是一种只在妊娠期表达的胎盘特异性蛋白，在未孕牛无表达，所以本试验以妊娠30d的数据为阴性对照，结果显示，其在妊娠150d表达量最高，在妊娠240d时表达量最低。而在妊娠早期，妊娠60d时表达量高于30d和90d。在妊娠中期(150d)PIAC8的表达量又逐渐增加并高于妊娠前期，随后又降至最低值；(3)与空怀期相比，在整个妊娠过程中PAG的rnRNA表达量随妊娠期的延长而增加，妊娠30d、90d和150d显著高于空怀期(P＜0.05)，妊娠60d和240d时极显著地高于空怀期(P＜0.01)。
结论：本研究表明，PAG可作为奶牛妊娠早期优势表达蛋白，对其表达调节和功能进行深入研究，可为奶牛早期无创性妊娠诊断提供重要的理论依据及一种新的思路。
本研究主要分为两个部分：
一、奶牛外周血中游离胎儿RNA的提取
由于血浆中胎儿游离RNA含量极少且存在形式特殊，提取出高质量的RNA存在着一定的困难，因此本试验中提取胎儿游离RNA是研究的一个重要环节。试验对比了常规RNA提取和柱式病毒RNAout试剂盒提取两种方法，结果显示：用普通的RNA提取方法不能获得血浆中游离的RNA，而采用柱式病毒RNAout试剂盒可以从血浆中提取出高质量的RNA。
二、奶牛妊娠期外周血中PAPPA，PLAC8和PAG的mRNA表达规律
在妊娠奶牛，PAPPA，PLAC8和PAG都可以作为一种妊娠标记蛋白。据目前的研究报道，PLAC8和PAG仅由胎盘组织分泌表达，具有妊娠特异性；PAPPA在其他组织也有微量表达，但表达水平远低于胎盘。本研究显示：(1)与空怀组相比，妊娠期血浆中的PAPPA的mRNA水平显著提高(P＜0.05)，而妊娠150d组与空怀组相比则差异极显著(P＜0.01);(2)PLAC8是一种只在妊娠期表达的胎盘特异性蛋白，在未孕牛无表达，所以本试验以妊娠30d的数据为阴性对照，结果显示，其在妊娠150d表达量最高，在妊娠240d时表达量最低。而在妊娠早期，妊娠60d时表达量高于30d和90d。在妊娠中期(150d)PIAC8的表达量又逐渐增加并高于妊娠前期，随后又降至最低值；(3)与空怀期相比，在整个妊娠过程中PAG的rnRNA表达量随妊娠期的延长而增加，妊娠30d、90d和150d显著高于空怀期(P＜0.05)，妊娠60d和240d时极显著地高于空怀期(P＜0.01)。
结论：本研究表明，PAG可作为奶牛妊娠早期优势表达蛋白，对其表达调节和功能进行深入研究，可为奶牛早期无创性妊娠诊断提供重要的理论依据及一种新的思路。