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亚油酸异构酶（Linoleic acid isomerase，LAI）可以催化亚油酸（LA）为共轭亚油酸（CLA），并具有转化率高、生产的CLA纯度高，反应条件温和等优点，吸引了很多研究者的目光。为了提高亚油酸异构酶的产量，人们通过PCR的方法将亚油酸异构酶基因克隆出来，并在大肠杆菌中进行重组、表达。但是由于大肠杆菌表达系统的缺陷性，重组蛋白多为无活性的包涵体，必须经过一系列复杂的变性、复性过程才能恢复其天然结构和生物活性，增加了生产成本。本课题选择枯草杆菌表达系统，对重组的LAI进行诱导表达，期望解决上述问题。首先从实验室保存的嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶基因质粒载体以及植物乳杆菌基因组中，分别进行质粒提取和基因组提取，然后，根据Genbank上提交的序列，运用PerlPrimer软件进行引物设计，通过PCR扩增的方法，分别以质粒载体和基因组为模板，获得两段亚油酸异构酶基因片段。将两段序列与PMD-19T Vector连接，转入大肠杆菌DH5α中，经双酶切和PCR鉴定后，重组克隆载体送往公司测序，成功构建了嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶克隆载体LA-T和植物乳杆菌亚油酸异构酶克隆载体LP-T。将测序结果进行Blast比对，并用生物信息学方法进行分析，初步判定克隆后序列与原序列性质接近，突变后合成的亚油酸异构酶性质与原蛋白性质接近，将其分别命名为LA-T和LP-T。选择枯草杆菌诱导型表达分泌载体pSBPTQ，用Xba I和Kpn I对重组克隆载体和表达载体进行过夜酶切，而后胶回收、连接转化至大肠杆菌DH5α中保存，命名为LA-pSBPTQ。将经过双酶切鉴定及PCR鉴定获得的重组表达载体通过化学法转化至枯草芽孢杆菌受体菌中，经抗性筛选和PCR鉴定后，获得转嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶基因的枯草芽孢工程菌。根据原表达载体性质，使用蔗糖作为诱导剂对重组质粒进行诱导培养。将培养56h的发酵液进行离心处理，分别取上清液和上清浓缩液进行SDS-PAGE检测，并使用紫外分光光度计法对上清液亚油酸异构酶活力进行检测。结果表明，在转基因枯草芽孢工程菌中，新构建的载体将亚油酸异构酶分泌到了胞外，上清中的亚油酸异构酶具有活性。