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NMDA受体(N-甲基-D-天冬氨酸受体,N-methyl-D-aspartate receptor)是离子型谷氨酸受体的一个亚型,在中枢神经系统发育及多种神经系统疾病中发挥重要的生理及病理功能。NMDA受体NR1亚基上存在“甘氨酸位点(glycine site)”,该位点被甘氨酸结合后,谷氨酸(glutamic acid)才能有效开放NMDA受体偶联的离子通道。多年研究显示,D-丝氨酸(D-serine,D-Ser)才是NMDA受体NR1亚基“甘氨酸位点”的内源性配体,D-Ser通过调节NMDA受体的激活参与机体多种生理及病理过程,其中包括痛觉信息的调制过程。针对中枢神经系统D-Ser功能的研究近年已成为神经科学领域研究的热点之一。电针(electroacupuncture,EA)是将传统针灸与电疗相结合,进而产生临床镇痛作用,但长时间或反复多次给予电针刺激,电针的镇痛效应会逐渐减低以致消失,表现为电针耐受(electroacupuncture tolerance,EA tolerance),限制其在临床中的运用。中脑导水管周围灰质(periaqueductal gray,PAG)是机体内源性镇痛系统的关键部位,特别是其腹外侧区(ventrolateral periaqueductal gray,vl PAG),在疼痛调制和吗啡耐受的形成、维持机制中均有重要作用。大量研究显示,吗啡耐受和电针耐受之间存在交叉耐受,但在vl PAG中D-Ser是否可以通过调节NMDA受体功能参与电针耐受的形成和维持机制,这一点未见文献报道。本研究旨在明确在vl PAG中D-Ser是否介入大鼠电针耐受的形成和维持机制。目的:观察大鼠中脑导水管周围灰质腹外侧区(vl PAG)中D-Ser在大鼠电针耐受形成和维持中的作用并探讨其初步的中枢神经化学机制。方法:SD大鼠外周穴位给予多次电针刺激后建立大鼠电针耐受模型;(1)观察电针耐受大鼠机械痛阈(MWT)、热痛阈(TWL)变化百分数的改变;(2)ELISA法检测大鼠在电针耐受形成前后vl PAG中D-Ser水平变化;(3)免疫组化、免疫印迹法检测大鼠电针形成前后vl PAG中SR的表达部位及蛋白表达量的变化情况;(4)免疫组化法检测大鼠电针耐受形成前后vl PAG中星形胶质细胞活化的情况;(5)电针耐受大鼠vl PAG微量注射不同剂量的星形胶质细胞抑制剂-氟代柠檬酸(Fc)后再行电针刺激,观察大鼠MWT、TWL变化百分数变化并检测D-Ser水平变化情况。结果:在各观察时间点,假电针组大鼠MWT、TWL变化百分数与正常组大鼠相比较,差异无统计学意义(P>0.05);电针组大鼠MWT、TWL变化百分数与正常组比较显著升高(P<0.001),但随着电针刺激次数的增多,MWT、TWL变化百分数逐渐下降,6次电针后MWT、TWL趋近于正常组痛阈变化百分数值,P>0.05,提示:大鼠电针耐受形成。同一时间点,电针耐受大鼠vl PAG中D-Ser水平升高、SR阳性细胞数和SR蛋白含量表达上调(P<0.001),且vl PAG中星形胶质细胞活化表达量增多,与正常组、假电针组比较,差异具有统计学意义(P<0.001);电针耐受大鼠vl PAG中微量注射不同剂量的Fc后再给予电针刺激,星型胶质细胞活化受抑制,vl PAG中D-Ser水平下降,大鼠MWT、TWL变化百分数升高,差异具有统计学意义(P<0.001),提示大鼠电针耐受缓解。结论:vl PAG中星形胶质细胞活化引起D-Ser释放增加参与大鼠电针耐受机制。