B7-H4在肾癌细胞核内表达及其核定位序列对HEK293细胞在SCID小鼠体内成瘤的影响

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目的:以临床肾癌组织标本为研究对象,检测B7-H4在肾癌细胞的核内表达情况,并分析其与临床特征之间的相关性;应用B7-H4野生型(B7-H4WT)及B7-H4核定位突变体(B7-H4H250Q MT)转染细胞株接种SCID小鼠,研究B7-H4核定位序列对HEK293细胞成瘤的影响,并初步探讨其对肿瘤发展的机制。方法:用免疫组化染色方法测定82例临床肾癌标本中B7-H4在细胞内的表达情况,并采集临床资料,分析B7-H4与肾癌临床病例特征之间的关系;分别采用本实验室成功构建并证实有B7-H4核定位的HEK293细胞(简称B7-H4WT/293)和B7-H4核定位突变体HEK293细胞(简称B7-H4H250Q MT/293)接种到SCID(严重联合免疫缺陷)小鼠的皮下,并以HEK293细胞作为对照(简称Mock/293),建立动物模型:将24只SCID小鼠随机分配成3组,在小鼠双侧腋下分别注射不同细胞,每侧接种的细胞量约为2×107个。8周后处死小鼠,测量比较各组瘤体的体积和质量,并进行免疫组化染色方法检验瘤体组织内B7-H4的表达情况。结果:1.B7-H4在肾癌的细胞膜、胞浆及胞核内都有表达;细胞核内和细胞表面B7-H4的表达水平与肾癌的分级、TNM分期、细胞核分级呈正相关性(p<0.05),而与患者的性别、年龄、有无临床症状、肿瘤的大小、淋巴结转移无明显相关性(p>0.05)。2. SCID小鼠皮下成瘤实验结果显示:B7-H4WT/293组瘤体与B7-H4H250Q MT/293组和Mock/293组瘤体相比,体积大(175.2±118.4mm3vs64.0±62.9mm3,70.8±42.2mm3, p<0.05),质量重(96.5±46.0mg vs35.9±28.7mg,43.8±28.6mg, p<0.05),差异有统计学意义;而B7-H4H250Q MT/293组和Mock/293组相比瘤体的体积和质量无明显差别(P>0.05)。3.瘤体免疫组化结果显示,B7-H4WT/293组B7-H4在细胞膜、胞浆、及细胞核内均有高表达,细胞核内阳性表达率93.75%(15/16),而B7-H4H250Q MT/293组和Mock/293组B7-H4细胞核内阳性表达率均为0。结论:B7-H4在肾癌中核内的高表达与患者的临床预后指标有明显相关,而B7-H4蛋白核定位显著促进了HEK293细胞在SCID小鼠体内生长,提示B7-H4分子可以作为肾癌患者病情评估以及预后判断的分子生物学指标。探讨B7-H4在肿瘤细胞中的表达和核定位分子机制,有可能对肾癌的临床诊断与治疗具有指导意义。
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