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髓过氧化物酶(Myeloperoxidase,MPO)是一种存在于正常人多形核中性白细胞(Polymorphonuclear neutrophils,PMN)嗜苯胺蓝颗粒(Azurophilic granules)中被糖基化的血红素包含形可溶酶,它通过催化形成强氧化物和次氯酸在自身免疫有氧杀灭微生物系统中扮演着重要角色。针对自身免疫系统性血管炎和炎症性等疾病,利用抗中性粒细胞胞浆抗体(p-ANCA)进行诊断已成为既定工具。临床上常见的自身抗原是人MPO及蛋白酶3(PR3),通过抗原特异性诊断设备检测与这些抗原相对应的来自于中性粒细胞嗜天青颗粒的自身抗体,能够很容易地诊断出与抗中性粒细胞胞浆抗体相关的疾病。作为p-ANCA免疫荧光图谱的主要标靶,人MPO自身抗体指出了某些疾病的程度,如:特发性新月体性肾小球肾炎,Churg-Strauss综合征,以及经典型结节性多动脉炎等相关疾病。临床上用于自身免疫系统相关疾病体外诊断的MPO以人源天然蛋白为最佳,但天然蛋白的资源有限,来源各异,导致纯化的天然抗原纯度低、批次之间不一致,且成本昂贵。由于表达和蛋白折叠技术的瓶颈限制,利用体外表达系统所获得的重组人MPO成本高昂,这些条件严重制约了自身免疫系统相关疾病体外诊断技术的发展。本研究通过将完整的人髓过氧化物酶MPO的cDNA克隆到带有6个组氨酸的供体质粒上,获得含人MPO基因的重组供体质粒;在大肠杆菌BmDH10Bac中和家蚕杆状病毒基因组杆粒(Bacmid)于转座子(Tn7)上发生转座,通过蓝白斑筛选出带有目的基因的克隆;随后在家蚕BmN细胞中制备含人MPO基因的重组病毒;以制备的重组病毒感染宿主昆虫家蚕(Bombyx mori),同时给家蚕添食一定量的血红素前体;收集含表达了人MPO的家蚕幼虫的体液,在裂解缓冲液存在下经超声波裂解,4℃下进行高速离心,收集的上清应用镍-柱亲和层析结合离子交换层析的方法进行分离纯化,最终获得目的产物人髓过氧化物酶。分析结果表明,重组人MPO能够在家蚕体内得到很好的表达和包装,蛋白质翻译后的(糖基化)修饰良好,分离纯化后的蛋白比活性达396.7±41.7 milliunits/mg,且能够被病人阳性血清所识别。利用家蚕-杆状病毒表达系统在五龄家蚕中制备的人重组MPO具与来源于人嗜中性粒细胞表达的MPO相当的比活性;且表达量高:平均每条蚕可制备高达1.7微克左右目的蛋白;成本低:由于避免了AcMNPV杆状病毒-Bac-to-Bac表达系统中昆虫细胞培养所需昂贵的培养基和胎牛血清,且家蚕饲养简单方便。本研究对利用家蚕作为生物反应器,大规模、低成本、高效率地制备重组人MPO提供了一条可行的新途径。