论文部分内容阅读
目的:1.观察隔药灸脐法治疗失眠症（Insommia disorder）心脾两虚证的临床疗效。2.观察隔药灸脐法对失眠大鼠行为学表现、海马中神经递质谷氨酸（Glu）、γ-氨基丁酸（GABA）、五羟色胺（5-HT）含量及五羟色胺受体亚型1A信使核糖核酸（5-HT1AR mRNA）相对表达量的影响。从谷氨酸/γ-氨基丁酸-谷氨酰胺（Glu/GABA-Gln）代谢环路、5-HT及其受体5-HT1AmRNA表达水平的调控机制角度探讨隔药灸脐法治疗失眠症的效应机制。方法:1.临床研究:本研究采用前瞻、单盲、分层随机、平行对照的临床试验设计方法,选择符合纳入标准的84例失眠症心脾两虚证患者,以ISI评分划分为轻度失眠、中度失眠,并以此为依据进行分层随机分组,试验组和对照组各42例。试验组采用隔药灸脐治疗,脐灸药物由半夏厚朴汤加减组成,对照组采用隔淀粉灸脐治疗,每5天治疗一次,共治疗6次。于治疗前后填写匹兹堡睡眠质量指数量表（Pittsburgh Sleep Quality Index,PSQI）、失眠严重程度指数量表（Insomnia Severity Index,ISI）、中医证候量表及疲劳量表-14（Fatigue Scale-14,FS-14）。以PSQI、ISI量表作为主要评价指标,中医证候、FS-14量表作为次要评价指标,观察隔药灸脐法治疗失眠症心脾两虚证的临床疗效。2.实验研究:48只SPF级雄性SD大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、隔药灸脐组、隔淀粉灸脐组,每组12只。以PCPA（对氯苯丙氨酸,para-chloropheny-lalanine,PCPA）造模作为失眠大鼠模型,在造模3天后,观察大鼠睡眠时间的变化,并以戊巴比妥钠（pentobarbital sodium）翻正实验进行失眠模型评价。造模成功后,隔药灸脐组、隔淀粉灸脐组分别给予隔药灸脐、隔淀粉灸脐治疗,每天治疗1次,共治疗8天。空白对照组、模型对照组仅予以相同方式的抓取、固定。在治疗结束后,观察4组大鼠旷场实验行为学表现,并处死,取海马组织,采用生化、酶联免疫吸附法、实时荧光定量PCR检测大鼠海马中Glu、GABA、5-HT含量及5-HT1AR mRNA相对表达量。结果:1.临床研究:（1）此次临床试验共观察84例符合纳入标准的失眠症心脾两虚证患者,脱落病例3例,最终完成病例为隔药灸脐组40例,隔淀粉灸脐组41例。在人口学资料、匹兹堡睡眠质量指数、失眠严重程度、中医证候积分、疲劳量表评分方面两组比较差异均无统计学意义（P＞0.05）,两组基线情况均衡可比。（2）隔药灸脐法对失眠症心脾两虚证患者PSQI的影响:隔药灸脐组治疗后睡眠质量、入睡时间、睡眠时间、睡眠效率、日间功能障碍评分及PSQI总分较治疗前显著降低（P＜0.01）,睡眠障碍、催眠药物评分较治疗前显著降低（P＜0.05）。隔淀粉灸脐组治疗后睡眠质量、睡眠时间、睡眠效率评分较治疗前显著降低（P＜0.05）,入睡时间、日间功能障碍评分及PSQI总分较治疗前显著降低（P＜0.01）,睡眠障碍、催眠药物评分与治疗前差异无统计学意义（P＞0.05）。治疗后,隔药灸脐组睡眠质量、入睡时间、睡眠时间、睡眠效率、日间功能障碍评分及PSQI总分均显著低于隔淀粉灸脐组（P＜0.01）,睡眠障碍、催眠药物评分显著低于隔淀粉灸脐组（P＜0.05）。（3）隔药灸脐法对失眠症心脾两虚证患者ISI的影响:隔药灸脐组、隔淀粉灸脐组治疗后ISI评分均较治疗前显著降低（P＜0.01）。治疗后隔药灸脐组ISI评分显著低于隔淀粉灸脐组（P＜0.01）。（4）隔药灸脐法对失眠症心脾两虚证患者中医证候的影响:隔药灸脐组、隔淀粉灸脐组治疗后中医证候总分均较治疗前显著降低（P＜0.01）。治疗后隔药灸脐组中医证候评分显著低于隔淀粉灸脐组（P＜0.01）。（5）隔药灸脐法对失眠症心脾两虚证患者FS-14的影响:隔药灸脐组治疗后FS-14总分、躯体疲劳评分较治疗前显著降低（P＜0.01）,脑力疲劳评分较治疗前显著降低（P＜0.05）。隔淀粉灸脐组治疗后FS-14总分、躯体疲劳评分较治疗前显著降低（P＜0.05）,脑力疲劳评分与治疗前比较差异无统计学意义（P＞0.05）。治疗后隔药灸脐组FS-14总分、躯体疲劳评分显著低于隔淀粉灸脐组（P＜0.01）,脑力疲劳评分显著低于隔淀粉灸脐组（P＜0.05）。2.实验研究:（1）PCPA造模对各组戊巴比妥钠翻正实验睡眠潜伏期及睡眠持续时间的影响:戊巴比妥钠翻正实验结果显示三组造模大鼠睡眠潜伏期较空白对照组均明显延长（P＜0.01）,睡眠持续时间较空白对照组均明显缩短（P＜0.01）。三组造模大鼠之间比较,睡眠潜伏期、睡眠持续时间差异均无统计学意义（P＞0.05）。（2）隔药灸脐法对失眠大鼠旷场活动直立次数、静止时间、运动总路程、粪便粒数的影响:模型对照组旷场实验静止时间显著低于空白对照组（P＜0.01）,运动总路程、直立次数、粪便粒数显著高于空白对照组（P＜0.01）。隔药灸脐组治疗后静止时间显著高于模型对照组（P＜0.01）,运动总路程、直立次数、粪便粒数显著低于模型对照组（P＜0.01）;隔淀粉灸脐组治疗后粪便粒数明显低于模型对照组（P＜0.05）,静止时间、运动总路程、直立次数与模型对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。治疗后隔药灸脐组静止时间显著高于隔淀粉灸脐组（P＜0.01）,运动总路程、直立次数显著低于隔淀粉灸脐组（P＜0.01）,粪便粒数与隔淀粉灸脐组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。（3）隔药灸脐法对大鼠海马Glu、GABA含量的影响:模型对照组海马Glu含量显著高于空白对照组,GABA含量显著低于空白对照组（P＜0.01）。隔药灸脐组治疗后海马Glu含量显著低于模型对照组,GABA含量显著高于模型对照组（P＜0.01）;隔淀粉灸脐组治疗后海马Glu含量显著低于模型对照组,GABA含量显著高于模型对照组比较（P＜0.05）。治疗后隔药灸脐组海马Glu含量与隔淀粉灸脐组差异无统计学意义（P＞0.05）,GABA含量显著高于隔淀粉灸脐组（P＜0.05）。（4）隔药灸脐法对大鼠海马5-HT含量及5-HT1AR mRNA相对表达的影响:模型对照组海马5-HT含量、5-HT1AR mRNA相对表达量显著低于空白对照组（P＜0.01）。隔药灸脐组治疗后海马5-HT含量、5-HT1AR mRNA相对表达量显著高于模型对照组（P＜0.01）;隔淀粉灸脐组治疗后海马5-HT含量、5-HT1AR mRNA相对表达量显著高于模型对照组（P＜0.05）。治疗后隔药灸脐组海马5-HT含量、5-HT1AR mRNA相对表达量显著高于隔淀粉灸脐组（P＜0.05）。结论:1.隔药灸脐法可有效改善失眠症心脾两虚证患者夜间睡眠状况、日间疲劳状态及中医症状,可有效提高睡眠质量、睡眠效率,延长睡眠时间,缩短入睡时间,减少睡眠障碍、催眠药物使用,改善日间功能,并减轻中医症状、脑力疲劳程度和体力疲劳程度。对于失眠症心脾两虚证患者夜间睡眠状况、日间疲劳状态及中医症状的改善作用,隔药灸脐法优于隔淀粉灸脐法。2.隔药灸脐法可改善失眠对大鼠自发活动的影响,有效调节失眠大鼠旷场实验运动路程、静止时间、直立次数、粪便粒数,降低失眠大鼠白天运动活力、兴奋程度,并缓解其焦虑程度、紧张状态。对于旷场实验大鼠行为学表现的调节作用,隔药灸脐法优于隔淀粉灸脐法。3.隔药灸脐法可升高大鼠海马GABA、5-HT含量及5-HT1AR mRNA表达水平,降低海马Glu含量,通过对海马Glu/GABA-Gln代谢环路、5-HT及其受体5-HT1A表达水平的调控,从而参与调节睡眠及觉醒过程不同时相的转换。对于大鼠海马Glu、5-HT、GABA含量及5-HT1AR mRNA表达水平的调节作用,隔药灸脐法优于隔淀粉灸脐法。