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柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus, CTV)引起的柑橘衰退病是一种具有经济重要性的病害,广泛分布于世界各柑桔产区,对全世界的柑桔产业造成了严重的威胁。CTV是长线形病毒属(Closterovirus)正义单链RNA (+ssRNA)病毒,具有12个开放读码框(ORF),可以编码19种以上的蛋白质产物。CTV经橘蚜以非循回半持久方式传播。本研究构建基因p20和p23的原核表达载体,并诱导表达蛋白p20和p23。应用大外壳蛋白p25的多克隆抗体,使用ELISA方法分析不同蚜虫传毒率CTV分离株中蛋白含量,并应用实时荧光定量分析不同毒源中病毒粒子相对含量,利用薄膜饲喂法使蚜虫获得重组蛋白p20、p25和p27并在毒源植株上获毒,分析蚜虫获毒量及传毒率的差异。本研究为CTV的流行病学、蚜传机制、蚜虫-CTV-寄主相互作用的研究提供了基础。主要研究结果如下：1.根据pET28a和pET22b多克隆位点及p20和p23核苷酸序列设计引物,进行基因克隆并测序,测序准确的单克隆经酶切连接后转化到BL21(DE3),诱导表达p20和p23融合蛋白。2.应用p25多克隆抗体,使用ELISA方法分析不同蚜虫传毒率CTV分离株中蛋白含量,以毒源CT11A、CT14A、CT16-2、CT77和CT立间的叶片为样品,阴阳结果OD405的比值分别为2.7246、1.6607、1.1093、0.8508、0.8366,表明p25蛋白含量在毒源CT11A、CT14A、CT16-2、CT77和CT立间中依次递减。3.应用相对RT-qPCR分析不同毒源中病毒粒子含量,结果表明CTV不同分离株系CT11A、CT14A和CT16-2的病毒粒子含量依次递减,但毒源中病毒粒子含量与蚜虫传毒能力高低不完全一致,这表明病毒浓度是影响传毒率的因素之一,可能其它因素也影响CTV的蚜虫传播。4.在褐色橘蚜人工饲料中添加原核表达的重组蛋白p25、p27和p20,蚜虫再获毒CT11A、CT16-2和CT立间,应用RT-qPCR分析获毒后蚜虫中的病毒量,与对照相比,除p27使蚜虫获毒CT11A的病毒数量升高外,所有的蚜虫带毒量均有所降低。5.褐色橘蚜人工饲料中添加原核表达的重组蛋白p25和p27,测得5头蚜虫对CT立间的传毒率分别为31.03%和35.71%,只取食人工饲料的蚜虫对CT立间的传毒率为40%。