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研究目的胶质瘤(glioma)是成人最常见、致死率最高的颅内恶性肿瘤。弥漫性较低级别胶质瘤(diffuse lower grade glioma,DLGG)是指位于幕上的WHO II级和Ⅲ级成人胶质瘤,约占所有胶质瘤的15%,手术难以完全切除的主要原因是肿瘤细胞弥漫侵袭多个脑叶。因此,了解DLGG细胞侵袭和转移的相关机制是治疗DLGG的关键。本研究团队前期研究发现,中枢神经系统轴突生长抑制因子Nogo-66及其受体NgR在胶质瘤中表达,并对胶质瘤的侵袭和转移产生影响。为了进一步研究Nogo-66和NgR在DLGG中的作用及相关机制,我们进行了一系列实验,希望为胶质瘤的诊断和治疗提供新的思路。研究方法收集武汉协和医院2016年9月至2017年12月病理诊断为DLGG的标本共25例。1.将同一肿瘤标本分为两份,一部分进行免疫组化分析胶质瘤标本中Nogo-66和NgR的表达情况,另一部分,提取DLGG原代细胞,经小分子干扰RNA(small interference RNA,SiRNA)转染抑制原代细胞中NgR基因的表达,SiRNA转染48h后提取RNA行q RT-PCR,SiRNA转染72h后行Western blot,检测DLGG原代细胞在转染前后NgR基因的表达情况。2.体外培养DLGG原代细胞,根据转染SiRNA的不同,以及Nogo-66的有无,将原代细胞分为四组,第一组NC(SiRNA阴性对照)+Nogo-66,第二组NC(SiRNA阴性对照)+PBS,第三组SiRNA+Nogo-66,第四组SiRNA+PBS,分别进行划痕实验,transwell迁移和侵袭实验,显微镜拍照,并进行统计学分析。研究结果1.DLGG标本经分别经NgR和Nogo-66抗体孵化后可见DLGG细胞有很高的NgR表达,而Nogo-66高表达于肿瘤组织间质。2.DLGG标本免疫荧光共聚焦结果显示,DLGG细胞有很强的NgR表达,可见NgR和Nogo-66共定位于MBP标记的白质纤维束旁,NgR阳性的DLGG细胞沿MBP标记的白质纤维束分布。3.q RT-PCR测定显示SiRNA转染48小时后,NgR基因m RNA表达量相对于阴性对照组显著下降,Western-blot实验证实SiRNA转染72小时后,NgR蛋白表达量相对于阴性对照组显著减少。4.划痕实验显示实验组(SiRNA+Nogo-66组)细胞迁移数量低于对照组(NC+Nogo-66组),transwell迁移实验表明实验组(SiRNA+Nogo-66组)细胞迁移数量显著低于对照组(NC+Nogo-66组)(P<0.05)。transwell侵袭实验显示实验组(SiRNA+Nogo-66组)侵袭的细胞数量显著低于对照组(NC+Nogo-66组)(P<0.05)。研究结论上述研究结果提示DLGG细胞有很强的NgR表达,并从形态学角度证实DLGG细胞沿白质纤维束分布。体外实验显示Nogo-66可促进DLGG细胞迁移、侵袭,RNA干扰使NgR基因沉默可抑制这一效应。