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目的:1.初步优选白术产地加工与炮制一体化工艺,探讨白术产地加工与炮制一体化技术的可行性,为产地加工与炮制一体化技术的进一步发展奠定基础。2.本实验收集不同产地36个批次的白术生品饮片,参照2015版《中国药典》白术外观性状及相关文献[1]对白术饮片进行等级划分,利用数学统计方法对传统性状鉴别指标和与品质相关联的现代化学指标对白术饮片等级进行相关性分析,明确外观性状、内在化学指标与饮片等级之间的关系,为白术饮片等级划分提供参考。
方法:1.以白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、白术总多糖、浸出物为评价指标,研究白术一体化(鲜切)加工方法和传统加工方法对白术质量的影响,优选白术传统产地加工方法和饮片切制方法,得到白术最佳产地加工方法和最佳饮片切制方法,并制备白术传统饮片,通过白术一体化加工方法的优化,得到白术一体化最佳加工方法,并制备白术一体化饮片,一体化饮片(鲜切)再与传统饮片进行比较。建立白术HPLC指纹图谱共有模式,对白术一体化加工方法和传统加工的饮片进行HPLC指纹图谱对比研究。建立小鼠脾虚模型,以小鼠肠推进率、体质量、脾脏指数为指标以及环磷酰胺诱导免疫抑制小鼠模型,测定小鼠血清中细胞因子白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)、γ-干扰素(IFN-γ)含量,研究白术一体化加工所得饮片与传统饮片对小鼠健脾作用与免疫系统的影响。2.白术生品饮片等级研究:(1)样品的收集:收集全国不同产地的白术饮片,共计36个批次,根据药典和传统外观性状分为三个等级,对白术不同等级饮片外观性状进行主成分分析。(2)相关指标含量的测定:建立白术3种内酯成分和白术总多糖的含量测定方法,利用高效液相色谱法、紫外-分光光度计测定含量,参照2015版《中国药典》对白术不同等级饮片中浸出物、水分、灰分进行测定。(3)白术饮片相关性研究:利用SPSS19.0对生品饮片外观性状与白术不同等级中各成分含量进行相关性分析,最终得到其内在联系。对白术指标成分进行主成分分析可知和聚类分析。建立白术HPLC指纹图谱共有模式,对白术不同等级饮片进行HPLC指纹图谱对比研究。建立小鼠脾虚模型,以小鼠肠推进率、体质量、脾脏指数为指标,研究白术不同等级饮片对小鼠健脾作用的影响。
结果:1.通过对白术传统产地加工方法的优选,得到白术直接干燥法得到的样品各成分含量较发汗法高。通过白术传统饮片切制工艺的优选,得到白术最佳切制工艺为:白术原药材,除去杂质,筛去灰渣,用药材1倍的水量抢水洗后浸泡2h,沥去水分,闷透软化1h,切成2~4mm厚片,50℃下干燥。对白术一体化加工方法进行优选,结果显示白术一体化加工方法得到样品中3种内酯含量均呈现烘干温度升高含量降低的趋势,当烘干温度为60℃时,白术多糖含量最高,浸出物、水分、灰分均无显著性差异,且厚片与薄片问各成分含量无显著性差异。采用综合评分法初步优选出白术一体化最佳加工方法为白术鲜切后晒干,白术一体化饮片与传统饮片进行比较,结果显示,一体化饮片各成分含量高于传统饮片。与白术对照指纹图谱共有模式比较,白术一体化加工方法和白术传统加工方法的饮片指纹图谱相似度均在0.900以上,表明相似度良好,化学成分较稳定。白术药效学实验结果显示,白术2种加工方法中,白术一体化饮片高、中、低剂量组和白术传统炮制饮片高、中、低剂量组对小鼠健脾均无显著性差异(P>0.05),对小鼠免疫系统的影响则与剂量相关,高、中低剂量对小鼠血清中IL-2和IFN-γ的含量有促进作用,对小鼠血清中IL-4含量无显著性差异,但在相同给药浓度下,一体化饮片与传统饮片无显著性差异。2.对白术饮片外观性状采用传统方法划分,可将饮片分为三个等级,对白术不同等级饮片外观性状进行主成分分析可知,第一主成分特征根为5.748,方差贡献率为96.398%,其累计贡献率>85%,故选择断面颜色、油室、裂隙、蜂窝状、菊花纹、质地作为白术分等级的外观指标。将不同等级饮片含量测定得白术内酯Ⅰ含量范围为0.0092~0.1929%、白术内酯Ⅱ含量范围0.0115~0.0436%、白术内酯Ⅲ含量范围为0.0119~0.1302%,白术多糖含量范围为15.85~50.54%。白术一等饮片含量范围:白术内酯Ⅰ为0.016~0.1929%、白术内酯Ⅱ为0.0171~0.04%、白术内酯Ⅲ为0.0173~0.1302%、多糖含量为22.11~49.48%;白术二等饮片含量范围:白术内酯Ⅰ为0.0109~0.0739%、白术内酯Ⅱ为0.0167~0.0436%、白术内酯Ⅲ为0.0128~0.0755%、多糖含量为16.33~50.54%;白术三等饮片含量范围:白术内酯Ⅰ为0.0092~0.0732%、白术内酯Ⅱ为0.0115~0.0323%、白术内酯Ⅲ为0.0119~0.0747%、多糖含量为15.85~48.51%。一等饮片各成分含量与二等饮片、三等饮片具有显著性差异,二等饮片与三等饮片各成分含量无显著性差异。对白术饮片不同等级指标成分进行主成分分析,结果表明第一主成分主成分特征根为2.397,贡献率为27.710%,第二主成分特征根为1.088,贡献率为20.426%。第三主成分特征根为0.928,贡献率为20.116%,累计方差贡献率为88.252%。第一主成分主要包括白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ,第二主成分包括白术多糖,第三主成分包括浸出物,三大主成分基本可以反映白术饮片信息。对白术进行聚类分析,由分析结果看,白术生品饮片大致分为两类,白术一等饮片聚为一类,白术二等饮片和三等饮片聚为一类,通过Persoon相关性分析可知,白术外观性状与内控指标具有相关性,数理统计结果显示,白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及总多糖含量越高,其等级越高,断面颜色深、油点多、菊花纹明显、有裂隙和蜂窝状的饮片质量较优。与白术对照指纹图谱共有模式比较,白术不同等级饮片指纹图谱相似度均在0.900以上,表明相似度良好,化学成分较稳定。在小鼠脾虚实验中,白术一等饮片对小鼠健脾的作用均大于二等饮片与三等饮片,且二等与三等饮片无显著性差异。
结论:1.通过对白术一体化加工方法的研究,表明白术产地加工与炮制一体化技术具有良好的可行性。2.根据实验结果和数据分析可将白术饮片分为两个等级:即一等饮片断面深红棕色或深褐色、油室多且密集、有裂隙、蜂窝状较多、菊花纹较明显、质地坚硬、长3~9cm、厚度2~4mm、白术内酯Ⅰ不得少于0.016%、白术内酯Ⅱ不得少于0.017%、白术内酯Ⅲ不得少于0.017%、多糖不得少于22%、浸出物不得少于35.0%、水分不得过15.0%、灰分不得过5.0%;二等饮片断面红棕色或黄白色、油室少或无油室、少有裂隙、蜂窝状较少、有菊花纹、质地坚硬或易折断、长3~8cm、厚度2~4mm、白术内酯Ⅰ不得少于0.01%、白术内酯Ⅱ不得少于0.011%、白术内酯Ⅲ不得少于0.012%、多糖不得少于15%、浸出物不得少于35.0%、水分不得过15.0%、灰分不得过5.0%。本试验通过现代科学技术和方法将白术饮片传统的外观性状与内在质量相结合对白术生品饮片等级进行划分,为饮片质量及饮片等级划分提供依据。
方法:1.以白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、白术总多糖、浸出物为评价指标,研究白术一体化(鲜切)加工方法和传统加工方法对白术质量的影响,优选白术传统产地加工方法和饮片切制方法,得到白术最佳产地加工方法和最佳饮片切制方法,并制备白术传统饮片,通过白术一体化加工方法的优化,得到白术一体化最佳加工方法,并制备白术一体化饮片,一体化饮片(鲜切)再与传统饮片进行比较。建立白术HPLC指纹图谱共有模式,对白术一体化加工方法和传统加工的饮片进行HPLC指纹图谱对比研究。建立小鼠脾虚模型,以小鼠肠推进率、体质量、脾脏指数为指标以及环磷酰胺诱导免疫抑制小鼠模型,测定小鼠血清中细胞因子白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)、γ-干扰素(IFN-γ)含量,研究白术一体化加工所得饮片与传统饮片对小鼠健脾作用与免疫系统的影响。2.白术生品饮片等级研究:(1)样品的收集:收集全国不同产地的白术饮片,共计36个批次,根据药典和传统外观性状分为三个等级,对白术不同等级饮片外观性状进行主成分分析。(2)相关指标含量的测定:建立白术3种内酯成分和白术总多糖的含量测定方法,利用高效液相色谱法、紫外-分光光度计测定含量,参照2015版《中国药典》对白术不同等级饮片中浸出物、水分、灰分进行测定。(3)白术饮片相关性研究:利用SPSS19.0对生品饮片外观性状与白术不同等级中各成分含量进行相关性分析,最终得到其内在联系。对白术指标成分进行主成分分析可知和聚类分析。建立白术HPLC指纹图谱共有模式,对白术不同等级饮片进行HPLC指纹图谱对比研究。建立小鼠脾虚模型,以小鼠肠推进率、体质量、脾脏指数为指标,研究白术不同等级饮片对小鼠健脾作用的影响。
结果:1.通过对白术传统产地加工方法的优选,得到白术直接干燥法得到的样品各成分含量较发汗法高。通过白术传统饮片切制工艺的优选,得到白术最佳切制工艺为:白术原药材,除去杂质,筛去灰渣,用药材1倍的水量抢水洗后浸泡2h,沥去水分,闷透软化1h,切成2~4mm厚片,50℃下干燥。对白术一体化加工方法进行优选,结果显示白术一体化加工方法得到样品中3种内酯含量均呈现烘干温度升高含量降低的趋势,当烘干温度为60℃时,白术多糖含量最高,浸出物、水分、灰分均无显著性差异,且厚片与薄片问各成分含量无显著性差异。采用综合评分法初步优选出白术一体化最佳加工方法为白术鲜切后晒干,白术一体化饮片与传统饮片进行比较,结果显示,一体化饮片各成分含量高于传统饮片。与白术对照指纹图谱共有模式比较,白术一体化加工方法和白术传统加工方法的饮片指纹图谱相似度均在0.900以上,表明相似度良好,化学成分较稳定。白术药效学实验结果显示,白术2种加工方法中,白术一体化饮片高、中、低剂量组和白术传统炮制饮片高、中、低剂量组对小鼠健脾均无显著性差异(P>0.05),对小鼠免疫系统的影响则与剂量相关,高、中低剂量对小鼠血清中IL-2和IFN-γ的含量有促进作用,对小鼠血清中IL-4含量无显著性差异,但在相同给药浓度下,一体化饮片与传统饮片无显著性差异。2.对白术饮片外观性状采用传统方法划分,可将饮片分为三个等级,对白术不同等级饮片外观性状进行主成分分析可知,第一主成分特征根为5.748,方差贡献率为96.398%,其累计贡献率>85%,故选择断面颜色、油室、裂隙、蜂窝状、菊花纹、质地作为白术分等级的外观指标。将不同等级饮片含量测定得白术内酯Ⅰ含量范围为0.0092~0.1929%、白术内酯Ⅱ含量范围0.0115~0.0436%、白术内酯Ⅲ含量范围为0.0119~0.1302%,白术多糖含量范围为15.85~50.54%。白术一等饮片含量范围:白术内酯Ⅰ为0.016~0.1929%、白术内酯Ⅱ为0.0171~0.04%、白术内酯Ⅲ为0.0173~0.1302%、多糖含量为22.11~49.48%;白术二等饮片含量范围:白术内酯Ⅰ为0.0109~0.0739%、白术内酯Ⅱ为0.0167~0.0436%、白术内酯Ⅲ为0.0128~0.0755%、多糖含量为16.33~50.54%;白术三等饮片含量范围:白术内酯Ⅰ为0.0092~0.0732%、白术内酯Ⅱ为0.0115~0.0323%、白术内酯Ⅲ为0.0119~0.0747%、多糖含量为15.85~48.51%。一等饮片各成分含量与二等饮片、三等饮片具有显著性差异,二等饮片与三等饮片各成分含量无显著性差异。对白术饮片不同等级指标成分进行主成分分析,结果表明第一主成分主成分特征根为2.397,贡献率为27.710%,第二主成分特征根为1.088,贡献率为20.426%。第三主成分特征根为0.928,贡献率为20.116%,累计方差贡献率为88.252%。第一主成分主要包括白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ,第二主成分包括白术多糖,第三主成分包括浸出物,三大主成分基本可以反映白术饮片信息。对白术进行聚类分析,由分析结果看,白术生品饮片大致分为两类,白术一等饮片聚为一类,白术二等饮片和三等饮片聚为一类,通过Persoon相关性分析可知,白术外观性状与内控指标具有相关性,数理统计结果显示,白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及总多糖含量越高,其等级越高,断面颜色深、油点多、菊花纹明显、有裂隙和蜂窝状的饮片质量较优。与白术对照指纹图谱共有模式比较,白术不同等级饮片指纹图谱相似度均在0.900以上,表明相似度良好,化学成分较稳定。在小鼠脾虚实验中,白术一等饮片对小鼠健脾的作用均大于二等饮片与三等饮片,且二等与三等饮片无显著性差异。
结论:1.通过对白术一体化加工方法的研究,表明白术产地加工与炮制一体化技术具有良好的可行性。2.根据实验结果和数据分析可将白术饮片分为两个等级:即一等饮片断面深红棕色或深褐色、油室多且密集、有裂隙、蜂窝状较多、菊花纹较明显、质地坚硬、长3~9cm、厚度2~4mm、白术内酯Ⅰ不得少于0.016%、白术内酯Ⅱ不得少于0.017%、白术内酯Ⅲ不得少于0.017%、多糖不得少于22%、浸出物不得少于35.0%、水分不得过15.0%、灰分不得过5.0%;二等饮片断面红棕色或黄白色、油室少或无油室、少有裂隙、蜂窝状较少、有菊花纹、质地坚硬或易折断、长3~8cm、厚度2~4mm、白术内酯Ⅰ不得少于0.01%、白术内酯Ⅱ不得少于0.011%、白术内酯Ⅲ不得少于0.012%、多糖不得少于15%、浸出物不得少于35.0%、水分不得过15.0%、灰分不得过5.0%。本试验通过现代科学技术和方法将白术饮片传统的外观性状与内在质量相结合对白术生品饮片等级进行划分,为饮片质量及饮片等级划分提供依据。