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目的：通过原代培养SD大鼠的乳鼠心肌细胞建立过氧化氢(H202)诱导心肌细胞衰老模型,探讨脂联素(adiponectin, APN)对氧化应激诱导的心肌细胞衰老的影响及线粒体自噬在其中的参与机制。方法：1.采用酶消化法,结合差速贴壁法和化学试剂(5-brdu)抑制法分离纯化SD大鼠乳鼠心室肌细胞,分离的心肌细胞培养于含20%胎牛血清的DMEM堵乔基甲。使用倒置相差显微镜观察细胞生长状态和自发搏动情况,并通过α-肌动蛋白免疫荧光法对培养心肌细胞进行鉴定2.选用培养72小时的单层心肌细胞,随机分为5组：(1)对照组：心肌细胞正常培养；(2)过氧化氢组(H2O2组)：培养基中加入终浓度为30μmol/L的H202培养2小时诱导心肌细胞衰老；(3)过氧化氢+脂联素组(H2O2+APN组)：培养基中加入终浓度为30mg/L脂联素与心肌细胞共同孵育48小时后,再加入H2O2诱导衰老；(4)过氧化氢+脂联素+阿糖腺苷组(H2O2+APN+AraA组)：培养基中加入终浓度分别为30mg/L脂联素和1mmol/LAraA与心肌细胞共同孵育48小时后,再加入H2O2诱导衰老；(5)过氧化氢+糖腺苷组(H2O2+AraA组)：加入1mmol/LAraA与心肌细胞共同孵育48小时后,再加入H2O2诱导衰老。3.实验终止后,使用衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色阳性作为计数衰老心肌细胞的指标。4.通过Western blot检测各组线粒体自噬相关蛋白LC3的表达情况。结果：1.细胞鉴定：倒置显微镜下可见细胞成簇生长,有规律的自发性搏动,频率约90-120次/分。荧光倒置显微镜下可见胞浆内呈现绿色荧光,即胞浆内表达α-肌动蛋白,符合心肌细胞的特征。2.衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色结果：与对照组相比,H2O2组心肌细胞SA-P-gal染色阳性率明显增加(P<0.05)。与H202组相比,H2O2+APN组SA-β-gal染色阳性率明显下降,差异显著(P<0.05)。H2O2+APN+AraA组较H2O2+APN组染色阳性率增加,有显著性差异(P<0.05)。H2O2+AraA组与H202组相比,染色阳性率增加,无显著性差异(P>0.05)。即APN预处理可明显抑制H202诱导的心肌细胞衰老,这一作用可以被AMPK途径抑制物AraA部分阻断。3. Western blot检测线粒体自噬相关蛋白LC3的表达情况：与H202组相比,H2O2+APN组LC3Ⅱ/Ⅰ表达明显增加(P<0.05)。H2O2+APN+AraA组较H2O2+APN组LC3Ⅱ/Ⅰ的表达下降,有显著性差异(P<0.05)。即APN可增强线粒体自噬相关蛋白的表达,加入AMPK途径抑制物后这一作用减弱结论：1.H2O2可以诱导心肌细胞衰老。2.脂联素可抑制氧化应激诱导的心肌细胞的衰老,同时可以增强心肌细胞的线粒体自噬作用。3.加入AMPK途径阻滞剂抑制线粒体自噬作用后,脂联素的抗心肌细胞衰老的作用减弱。4.脂联素可能通过AMPK途径激活线粒体自噬,从而发挥抑制心肌细胞衰老的作用。